抗栓肽基因的克隆和表达

被引：5

作者：

劳兴珍 ^{[1
]}

汤慧 ^{[1
]}

吴国球 ^{[2
]}

郑珩 ^{[1
]}

机构：

[1] 中国药科大学生命科学与技术学院

[2] 东南大学附属中大医院检验科

来源：

药物生物技术 | 2006年 / 03期

关键词：

抗栓肽; 融合表达; 抑制ADP诱导的血小板聚集活性;

D O I：

10.19526/j.cnki.1005-8915.2006.03.005

中图分类号：

Q78 [基因工程（遗传工程）];

学科分类号：

071007 ; 0836 ; 090102 ;

摘要：

抗栓肽(Decorsin)是糖蛋白Ⅱb-Ⅲa(GPⅡb-Ⅲa)的强拮抗剂,能抑制血小板聚集。实验通过设计两对引物,经PCR获得抗栓肽的结构基因,并将基因插入原核表达载体pET32a硫氧还蛋白(TrxA)的下游。将重组质粒转化至大肠杆菌BL21(DE3),进行诱导表达,表达产物以可溶形式存在于胞内,占菌体总蛋白的35%。利用表达载体自身所带的His×6纯化标签,可将融合蛋白通过金属螯合亲和层析柱一步纯化,纯化的蛋白质经SDS-PAGE分析达到电泳纯。体外的抑制血小板聚集实验结果表明,融合蛋白具有显著的抑制ADP诱导的血小板聚集活性,抑制常数IC50为500 nmol/L。

引用

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