常规PCR与RACE结合法快速从cDNA文库中克隆基因

被引：2

作者：

戚金亮

马小娟

王丽

印莉萍

韩振海

机构：

[1] 中国农业大学农学与生物技术学院果树分子生物学实验室

[2] 首都师范大学生物系遗传与生物工程重点实验室

[3] 中国农业大学农学与生物技术学院果树分子生物学实验室北京

[4] 北京

来源：

首都师范大学学报(自然科学版) | 2004年 / 01期

基金：

北京市自然科学基金;

关键词：

PCR; RACE; cDNA克隆; cDNA文库; Fe(Ⅱ)-转运蛋白基因;

D O I：

10.19789/j.1004-9398.2004.01.013

中图分类号：

Q78 [基因工程（遗传工程）];

学科分类号：

071007 ; 0836 ; 090102 ;

摘要：

首先根据Fe(Ⅱ ) 转运蛋白基因家族的保守区设计同源的常规PCR引物 (F1,R1) ,扩增出 4 90bp的特异片段 .然后根据RACE法原理 ,巧妙地设计 3′RACE(F2 )和 5′RACE(R3)特异性引物 ,使两者既能分别与文库载体上的筛选扩增引物配对扩增cDNA 3′和 5′末端序列 ,又能使扩增出的 3′RACE和 5′RACE产物序列有重叠部分 ;另外设计引物时还兼顾到使F2和R3也能配对 ,从而能对 3′RACE和 5′RACE扩增产物进行双特异性引物常规PCR鉴定 .该方案不但能够直接根据序列鉴定 3′RACE和 5′RACE产物是否为同一基因序列 ,还能快捷地用常规PCR鉴定 3′RACE和5′RACE扩增产物是否为特异性扩增 ,避免了对非特异性扩增产物的克隆测序等繁琐的鉴定过程 ,优化了基因克隆策略 .最后根据拼读出的全长序列设计引物 (F4 ,R4 )扩增出完整编码区 .应用该方法成功地从小金海棠缺铁处理的根系cDNA文库中克隆了Fe(Ⅱ ) 转运蛋白基因的cDNA .说明该方案是一种从cDNA文库中克隆目的基因的快捷优化方法

引用

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共 4 条

[1] 用PCR法从cDNA文库中快速克隆基因 [J].