EHEC O157∶H7志贺毒素ⅡA1亚单位蛋白的构建表达与免疫原性鉴定

被引：7

作者：

罗萍

曾浩

易勇

张卫军

郭鹰

刘璐

陈洪章

邹全明

机构：

[1] 第三军医大学临床微生物学及临床免疫学教研室

来源：

免疫学杂志 | 2008年 / 03期

关键词：

O157H7; STX2A1; 免疫原性;

D O I：

10.13431/j.cnki.immunol.j.20080077

中图分类号：

R392 [医学免疫学];

学科分类号：

100102 ;

摘要：

目的构建表达GST-STX2A1融合蛋白并鉴定其免疫原性。方法通过PCR反应从EHEC O157∶H7EDL933标准株菌中扩增STX2A1基因,将此基因克隆到GST融合蛋白原核表达载体PGEX-6p-1,得到阳性克隆PGEX-6p-1/STX2A1,转化大肠杆菌BL21,IPTG诱导GST-STX2A1融合蛋白的表达,采用亲和层析纯化该蛋白,SDS-PAGE分析其表达量、表达形式和纯度;用纯化的融合蛋白免疫Balb/c小鼠,免疫双向扩散鉴定抗血清效价,Western blotting鉴定抗血清的特异性。结果成功构建重组质粒PGEX-6p-1/STX2A1,经DNA测序证实插入序列与设计完全一致,并在大肠杆菌中表达出Mr约为5.3×104大小的可溶性目的蛋白,经亲和层析纯化后纯度可达90%,免疫Balb/c小鼠产生的抗血清效价为1∶16,Western blotting表明可与天然STX2A蛋白反应。结论在大肠杆菌中成功表达了可溶性的GST-STX2A1融合蛋白,该蛋白具有较好的免疫原性,为O157∶H7亚单位疫苗及制备抗STX2A1的单克隆抗体提供了必要的物质基础。

引用

页码：287 / 290

页数：4

共 4 条

[1] 抗重组志贺毒素ⅡB亚基单克隆抗体的制备及生物学特性鉴定 [J].

陈洪章 ;

邹全明 ;

罗萍 ;

毛旭虎 ;

曾浩 ;

马颖 ;

余抒 ;

曾明 .

免疫学杂志, 2007, (02) :148-151

[2] EHECO157∶H7志贺样毒素Ⅱ结合亚单位Stx2B的基因克隆、表达与纯化 [J].

马颖 ;

毛旭虎 ;

邹全明 ;

易勇 ;

程建平 ;

曾明 ;

张卫军 .

中华微生物学和免疫学杂志, 2006, (02) :155-158

[3]

Structure of Shiga Toxin Type2(Stx2)from Escherichia coli O157∶H7 .2 Fraser ME,Fujinaga M,Cherney MM,et al. J Biol Chem . 2004

[4]

Theriskof the hemolytic-uremic syndrome after antibiotic treatment of Escherichia coli O157:H7infections .2 Wong CS,Jelacic S,Habeeb RL,et al. NEngl J Med . 2000

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