基于地高辛标记对小麦进行Southern杂交分析主要影响因素的优化和验证

被引：7

作者：

刘禄 ^{[1
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牛焱焱 ^{[2
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雷昊 ^{[4
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林志珊 ^{[2
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赵翔宇 ^{[1
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叶兴国 ^{[2
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张宪省 ^{[1
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机构：

[1] 山东农业大学发育分子生物学实验室/国家重点实验室

[2] 中国农业科学院作物科学研究所/国家农作物基因资源与基因改良重大科学工程/农业部作物遗传改良与育种重点开放实验室

[3] 中国科学技术大学

[4] 北京城市学院

来源：

植物遗传资源学报 | 2012年 / 13卷 / 02期

关键词：

小麦; 地高辛标记; 随机引物; PCR法标记探针; 免疫检测; Southern杂交;

D O I：

10.13430/j.cnki.jpgr.2012.02.005

中图分类号：

S512.1 [小麦];

学科分类号：

0901 ;

摘要：

以转基因小麦和野生型小麦DNA为材料,对利用地高辛标记对小麦基因组DNA进行Southern杂交分析的影响因素进行了优化研究,包括探针制备与纯化、样品DNA量、酶切体系、真空转印条件、杂交条件、免疫检测方法等。结果表明,对随机引物标记的模板和标记后的探针进行纯化可明显提高探针的标记效率,10μg高质量的DNA样品在80μl的体系中,酶切8～12h可获得良好的效果;真空转膜时使用碱性液比中性液获得的转膜效果更干净;试剂纯度、杂交温度及杂交炉转速等均对杂交效果产生重要影响;配合改进的CSPD涂布方法,使用化学发光检测系统比单纯使用X光片显像更易操作,背景更干净;本研究所优化的地高辛标记的小麦Southern杂交分析显示出较高的灵敏度和信噪比,结果稳定,可克服同位素标记对实验条件、设备及实验人员身体状况等限制,在普通实验室推广应用。

引用

页码：182 / 188

页数：7

共 10 条

[1] 地高辛随机引物法标记探针的Southern杂交技术优化 [J].