普通小麦7B染色体的显微分离和低拷贝专化DNA序列的克隆

以普通小麦“中国春”7B单体的花粉母细胞为材料 ,显微分离出 7B染色体 .经蛋白酶K和DNA拓扑异构酶Ⅰ处理后进行 1～ 3轮DOP PCR扩增 ,产生了 1 5 0～ 70 0bp的连续DNA片段 .基因组Southern杂交证实扩增的DNA源自小麦基因组 .将大于 2 0 0bp的第 3轮PCR扩增产物( 5 0 μL)克隆后 ,可产生 2 0 0 0 0个重组克隆 .对随机选取的 5 0个克隆分析表明 ,其中 2 1个克隆产生了大小为 2 40～ 6 0 0bp的清晰PCR产物 .点杂交结果表明 ,2 1个克隆中 1 1个 (～ 5 5 % )为低拷贝序列 ,1 0个 (～ 45 % )为重复序列 .对“中国春”全套“缺体 四体”基因组DNA的Southern杂交结果表明 ,产生清晰杂交谱带的 6个低拷贝克隆均为 7B染色体专化或第 7部分同源群专化序列 ;而随机选取的 3个重复序列则为没有专化性的弥散型重复序列