芍药肌动蛋白基因组DNA的克隆及分析

被引：3

作者：

范丙友 ^{[1
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张文婷 ^{[1
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徐杰 ^{[1
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骞光耀 ^{[1
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高水平 ^{[2
]}

郭丽丽 ^{[1
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侯小改 ^{[1
]}

机构：

[1] 河南科技大学农学院河南省高校牡丹工程技术中心

[2] 河南科技大学林学院

来源：

中草药 | 2014年 / 45卷 / 14期

关键词：

芍药; 肌动蛋白; 基因组DNA; 克隆; 基因结构; 表达分析;

D O I：

暂无

中图分类号：

S682.12 [];

学科分类号：

摘要：

目的克隆芍药Paeonia lactiflora肌动蛋白(Actin)基因组DNA序列并解析基因结构,分析Actin基因在芍药不同组织中的表达情况。方法根据本课题组报道的芍药Actin基因cDNA序列(JX310002)设计特异性引物,以芍药栽培品种"桃花飞雪"总DNA为模板,用KOD-Plus高保真DNA聚合酶扩增芍药Actin基因组基因,克隆PCR产物并进行测序。应用生物信息学软件预测芍药Actin基因的外显子及内含子,基于Blastn程序分析芍药Actin基因在核苷酸水平上的同源性,应用MEGA5.0软件构建分子系统进化树;设计跨越内含子的半定量RT-PCR扩增引物,分析芍药Actin基因在芍药根、茎、叶、花中的表达情况。结果测序结果表明芍药Actin基因组DNA序列全长1 405 bp,含4个外显子和3个内含子,3个内含子中共6个剪接位点均遵循高等真核生物5’端供位GU与3’端受位AG模式;共编码377个氨基酸,GenBank登录号为KF363830。设计了一对半定量RT-PCR扩增引物,其中上游引物跨越了芍药Actin基因的第1个内含子,可有效防止由DNA污染而造成RT-PCR扩增的假阳性;半定量RT-PCR分析结果表明Actin基因在芍药根、茎、叶、花等不同组织中的表达量保持恒定。结论首次克隆了芍药Actin基因组DNA序列并明确了其基因结构,半定量RT-PCR分析结果表明Actin基因可以作为芍药功能基因表达分析的内标基因。

引用

页码：2069 / 2074

页数：6

共 20 条

[11]

RNA extraction from different apple tissues rich in polyphenols and polysaccharides for cDNA library construction [J].