胃癌血清适配体的筛选及其鉴定

被引：5

作者：

葸玉琴 ^{[1
]}

赵运旺 ^{[1
]}

李东东 ^{[2
]}

曾家豫 ^{[1
]}

廖世奇 ^{[2
]}

机构：

[1] 西北师范大学生命科学学院

[2] 甘肃省医学科学研究院医学分子生物学研究中心

来源：

南京医科大学学报(自然科学版) | 2016年 / 36卷 / 11期

关键词：

胃癌血清; 适配体; 鉴定;

D O I：

暂无

中图分类号：

R735.2 [胃肿瘤];

学科分类号：

100214 ;

摘要：

目的 :以羧基化琼脂磁珠为筛选介质,利用RT-PCR和靶标替换消减SELEX技术从胃癌血清中筛选得到高特异性、强亲和力的适配体。方法:以离心超滤(50 000超滤管)法处理后的胃癌血清作为靶分子,羧基化琼脂磁珠为载体,先将寡核苷酸文库与反筛磁珠(结合正常血清)结合,取上清再与筛选磁珠(结合胃癌血清)结合,洗去未结合的寡核苷酸分子,对结合在磁珠上的寡核苷酸分子进行分离和扩增,λ酶切法制备ss DNA次级库,进行10轮筛选,将第10轮的文库扩增得到ds DNA,利用胶回收试剂盒回收纯化目的片段的ds DNA,并与p MDTM18-T载体连接,转化大肠杆菌DH5α感受态细胞,挑取阳性克隆,测序获得适配体序列,同时用流式细胞术测定胃癌血清适配体的Kd值。结果:经过10轮筛选后,得到20条与胃癌血清结合的适配体。结论:特异性检测表明,筛选得到的胃癌血清适配体与胃癌血清的结合解离常数均在纳摩尔级水平,其中5、7、16、17、18号适配体能高特异性、强亲和力结合胃癌血清,与正常人血清不结合。该研究为胃癌的早期诊断提供了实验基础。

引用

页码：1306 / 1312

页数：7

共 18 条

[1] 癌胚抗原特异性单克隆抗体(Anti-CEA)核酸适配体的筛选 [J].