软骨细胞外基质与壳聚糖复合制备组织工程软骨支架及其性能研究

目的探讨采用壳聚糖与脱细胞软骨基质复合制备组织工程软骨支架的可行性,检测其理化性能和细胞相容性。方法取天然人软骨粉碎,取100 nm～5μm软骨微丝,脱细胞处理后制备为质量浓度1%悬液,与质量浓度2%壳聚糖醋酸溶液按1:1(重量比)充分搅拌混合,冷冻干燥制备复合支架。对支架交联,并进行组织学、扫描电镜、孔隙率及吸水性测定、生物力学评估,MTT法分析支架浸提液毒性。分离培养犬软骨细胞,种植到支架上,倒置显微镜、电镜观察细胞在支架的生长、分化情况。结果组织学显示支架中无细胞碎片残留,Ⅱ型胶原免疫组化染色阳性。扫描电镜显示支架内孔洞相互连通似海绵状,孔径为(136.2±34.9)μm,孔隙率为81.4%±3.5%,吸水性约为1525.7±129.3%。支架纵向弹性模量为(1.940±0.335)MPa。MTT法显示不同浓度支架浸提液与对照培养液吸光度值比较,差异无统计学意义(P>0.05)。倒置显微镜观察,细胞在支架上粘附良好,扫描电镜下细胞在支架上均匀分布,呈圆形或椭圆形,有基质分泌。结论软骨细胞外基质和壳聚糖复合制备的仿生三维多孔双相支架,具有较高的孔隙率和吸水性,良好的生物力学特性,无毒,生物相容性良好,是组织工程软骨的良好支架载体。