枸杞ISSR反应体系的优化与应用

【目的】探索枸杞遗传变异与亲缘关系分析的新方法,为枸杞的种质遗传多样性分析和杂交育种提供了初步理论依据。【方法】以枸杞为试材,对ISSR-PCR反应中各主要影响因子进行优化筛选,确立枸杞ISSR-PCR的最佳反应体系;并利用该优化体系,对枸杞的8个品种(系)和5个花药培养再生植株进行种质遗传多样性分析。【结果】枸杞ISSR-PCR的最佳反应体系为:每25μL反应体系中含10×Buffer 2.5μL,40 ng模板DNA,2.0 mmol/LMg2+,0.1 mmol/L dNTPs,0.6μmol/L引物,1 UTaqDNA聚合酶;15个引物在13份枸杞种质中共扩增出80个条带,其中多态性条带有61条,多态位点比率为76.3%;13份供试材料可分为2类:一类群含有宁杞1号及其花培植株、宁杞2号及其花培植株、小麻叶、宁杞3号及其花培植株、06-16及其花培植株;另一类群含有04-03-32及其花培植株、04-03-29、北方。从聚类结果来看,宁杞2号、宁杞3号、04-03-32经花药培养所得到的再生植株与母株相比,在DNA水平上发生了一定程度变异。【结论】建立的ISSR-PCR优化反应体系可用于枸杞遗传多样性和基因组研究。