稳定剂保护PCR扩增dU-DNA效果研究

目的 :了解 94℃灭活UDG与不灭活及扩增产物加稳定剂与不加稳定剂对DNA杂交效率的影响。方法 :采用微孔板DNA杂交技术检测PCR扩增dU -DNA杂交效果。以不加UDG组DNA杂交A值为对照、计算杂交百分率。结果 :不加UDG组扩增前后未经 94℃灭活处理 - 2 0℃保存 2 0h杂交效率为 90 .2 93% ,加UDG组在 4℃、室温、37℃放置 2 0h ,杂交效率为 2 0 .15 % ,2 1.37% ,2 9.37%。加UDG并增加 94℃灭活步骤、37℃水浴放置 2 0h ,杂交效率为 73.5 7% ,78.82 %。在此基础上加入稳定剂 37℃水浴 4 3h杂交效率达到 99.88%～ 10 0 %。 37℃水浴 6 7h杂交效率仍达到 86 .0 6 %～ 97.10 %。结论 :上述结果证实用于抗污染时 ,扩增前后增设 94℃灭活 10min可提高杂交效率。加入稳定剂可使杂交A值 1.80达到对照组A值 1.81水平。提示稳定剂对保护PCR扩增dU -DNA有极其重要作用。