山茶花叶片DNA提取及RAPD反应体系的研究

山茶花(Camellia japonica L.)是我国特产的名贵花卉之一,由于其品种繁多,在系统分类和品种鉴定上存在一定的难度。本研究针对山茶花的DNA提取方法和RAPD扩增体系进行了摸索,旨在为山茶花在DNA水平的分类鉴定和分子生物学方面研究打下一定的基础。实验采用改进的CTAB法提取山茶花叶片DNA,得到的DNA纯度较高,OD260/OD230值为1.90～2.0,OD260/OD280值为1.80～1.83,得率也较高,一般在150～200μg·g-1左右,片段完整性较好,大于20kb,符合分子遗传实验的要求;在山茶花RAPD扩增条件的研究中,发现20μL反应体系中加入100ngDNA、125μmol·L-1dNTP(each)、1.2μmol·L-1Mg2+、1×Buffer、0.5μmol·L-1引物、1UTaq酶最为合适,退火温度一般设为37℃左右,扩增产物的电泳条带数多、清晰、明亮。