重组酵母细胞快速筛选环境雌激素系统的建立

目的建立环境雌激素的体外快速筛选方法。方法通过分子生物学技术将雌激素效应元件(ERE)插入LacZ(β-半乳糖苷酶)报告基因的上游,并将其置于重组酵母细胞雌激素受体(ER)的调控之下。观察了不同浓度的β-雌二醇(1×10-8、1×10-6、1×10-4、1×10-3、1×10-2、1×10-1、1、10、100nmol/L)作用4和8h对重组酵母细胞β-半乳糖苷酶的活力的影响,以及3种重组酵母细胞细胞壁破碎法——冰冻法、超声波破碎法、氯仿化学裂解法对重组酵母细胞β-半乳糖苷酶的活力的影响,观察了不同浓度的苯甲酸雌二醇(200、1000、5000、25000、125000nmol/L)、β-雌二醇(0.0001、0.001、0.01、0.1、10、100、1000nmol/L)和双酚A(0.0001、0.001、0.01、0.1、1、10nmol/L)对重组酵母细胞β-半乳糖苷酶的活力的影响。结果经PCR鉴定,雌激素调控的LacZ基因重组酵母细胞构建成功。重组酵母细胞暴露于β-雌二醇4和8h,时间-剂量-效应关系无明显变化;超声波破碎法对酵母细胞破碎效果最好,呈“S”型剂量-效应曲线;用超声波破碎法对3种受试物试验发现,β-雌二醇活力最强,双酚A次之,苯甲酸雌二醇活力最低。结论经雌激素受体介导的环境雌激素酵母评价系统成功建立且比较稳定。