五节芒ISSR-PCR反应体系的优化

[目的]保护五节芒的种质资源并为其开发利用奠定基础。[方法]以五节芒DNA为材料,分析DNA浓度、Mg2+浓度、dNTP浓度、TaqDNA聚合酶的含量以及退火温度对ISSR-PCR扩增结果的影响。并通过单因子试验对ISSR-PCR反应体系进行优化。[结果]建立了五节芒ISSR-PCR的最佳体系:25μl反应体系中10×PCR Buffer 2.5μl、0.2 mmol/L 4×dNTP、1.5 mmol/LMg2+、0.75 UTaqDNA聚合酶。PCR反应程序为94℃预变性5 m in;94℃变性30 s;51～53℃退火30 s,72℃延伸50 s,40个循环;72℃再延伸7 m in。利用优化反应体系从100个ISSR通用引物中筛选出了11个稳定性高、重复性好的引物。[结论]这一优化体系的建立为今后利用ISSR标记技术研究五节芒遗传多样性奠定了基础。