一种高效、稳定的分泌型原核表达载体的构建及应用

被引：7

作者：

杨海杰

张军

罗文新

李少伟

管保全

夏宁邵

机构：

[1] 厦门大学生命科学学院细胞生物学与肿瘤细胞工程教育部重点实验室

[2] 厦门大学生命科学学院细胞生物学与肿瘤细胞工程教育部重点实验室厦门

[3] 厦门

来源：

生物技术通讯 | 2003年 / 06期

关键词：

原核表达载体; 高效表达; 分泌; ompT;

D O I：

暂无

中图分类号：

Q78 [基因工程（遗传工程）];

学科分类号：

071007 [遗传学];

摘要：

以本室构建的原核表达载体pTO-T7为基础载体,PCR合成ompT引导序列,插入该载体多克隆位点上游,构建了分泌型原核表达载体pTO-OT。将2个外源基因克隆至pTO-OT,2个重组质粒在大肠杆菌中均得以高效表达,表达量为25％-30％。Western印迹分析证实了重组蛋白在大肠杆菌中表达后可被信号肽酶有效识别,切割后的重组蛋白具有良好的免疫学活性。对重组表达菌株的连续传代实验证实了该表达载体具有良好的遗传稳定性,显示了该原核表达载体在基因工程中的应用价值。

引用

页码：494 / 498

页数：5

共 8 条

[1]

分子克隆操作指南.[M].[美]曼尼阿蒂斯(Maniatis;T·)等著;余茂效译.科学出版社.1986,

[2]

Secretion of recombinant proteins by gram-negative bacteria [J].

Sandkvist, M ;

Bagdasarian, M .

CURRENT OPINION IN BIOTECHNOLOGY, 1996, 7 (05) :505-511

[3]

The Enzymology of Protein Translocation Across the Escherichia coli Plasma Membrane.[J].W Wickner;A J M Driessen;F U Haril.Annual Review of Biochemistry.1991,

[4]

二种多管水母光蛋白基因的分离、表达及生物活性初步研究 [J].