产紫青霉β-葡萄糖醛酸苷酶基因的克隆与原核表达

被引：20

作者：

宋占科 ^{[1
]}

王小艳 ^{[2
]}

陈国强 ^{[1
]}

李春 ^{[1
,2
]}

机构：

[1] 北京理工大学生命科学与技术学院

[2] 石河子大学化学化工学院

来源：

化工学报 | 2008年 / 12期

基金：

北京市自然科学基金;

关键词：

甘草酸; β-葡萄糖醛酸苷酶; 克隆; 产紫青霉;

D O I：

暂无

中图分类号：

Q78 [基因工程（遗传工程）];

学科分类号：

071007 [遗传学];

摘要：

产紫青霉(Penicillium purpurogenum Li-3)β-葡萄糖醛酸苷酶可定向转化甘草酸生成单葡萄糖醛酸基甘草次酸。根据β-葡萄糖醛酸苷酶氨基酸序列的同源保守区设计简并引物,PCR扩增克隆得到β-葡萄糖醛酸苷酶编码基因pgus(GenBank登录号:EU095019),该基因全长1815bp,编码604个氨基酸,理论单亚基分子量为67.77×103,含有4个潜在的N-糖基化位点。构建原核表达载体pET-28a(+)-pgus,转化大肠杆菌BL21(DE3),获得高效表达pgus基因的重组菌。经IPTG诱导表达、Ni2+-NTA亲和层析柱纯化的重组酶PGUS-E,纯度达到95%以上,得率为25.6mg·L-1,SDS-PAGE分析检测分子量约为70×103,比酶活达到6368U·mg-1。

引用

页码：3101 / 3106

页数：6

共 7 条

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