共 2 条
突变型[12Asp]K-ras4B基因的致瘤作用及其机制的探讨
被引：1
作者：
桂黎明
魏丽惠
张颖妹
王建六
王应
陈英
马大龙
机构：
[1] 北京大学人民医院妇科,北京大学人民医院妇科,北京大学人类疾病基因研究中心,北京大学人民医院妇科,北京大学人类疾病基因研究中心,北京大学人类疾病基因研究中心,北京大学人类疾病基因研究中心北京,北京,北京,北京,北京,北京
来源：
关键词：
ras基因;
致瘤作用;
Raf信号通路;
转化;
D O I：
暂无
中图分类号：
R730.2 [肿瘤病理学、病因学];
学科分类号：
摘要：
背景与目的:有资料提示K-ras基因突变可能与子宫内膜癌的发生有关。本研究在发现子宫内膜腺癌HEC-1A细胞有K-ras基因第12密码子突变的基础上,探讨犤12Asp犦K-ras4B突变基因的致瘤性及其发生机制。方法:(1)用RT-PCR方法扩增犤12Asp犦K-ras4B基因全长cDNA,将此cDNA插入真核表达载体pcDI,构建pcDI-犤12Asp犦K-ras4B真核表达质粒;(2)观察真核表达质粒pcDI-犤12Asp犦K-ras4B转染前后细胞形态学改变,用MTT方法、3H掺入实验、集落形成实验检测转染前后细胞体外生长的变化,以及用转基因肿瘤细胞裸鼠异种接种成瘤实验,了解犤12Asp犦K-ras4B的致瘤作用。结果:(1)成功构建了真核表达质粒pcDI-犤12Asp犦K-ras4B。(2)通过转染前后细胞形态学变化、体外增殖变化、软琼脂集落形成实验以及裸鼠皮下转染细胞接种实验,证明犤12Asp犦K-ras4B基因具有致瘤作用。(3)将pCMV-RasN17质粒转染到pcDI-犤12Asp犦K-ras4B细胞,与未转染细胞比较,发现pcDI-犤12Asp犦K-ras4B细胞增生受到明显抑制。(4)分别将pCMV-RafS621A和pCMV-RafCAAX质粒转染到pcDI-犤12Asp犦K-ras4BNIH3T3细胞,与未转染的细胞比较,转染pCMV-RafS621A质粒的pcDI-犤12Asp犦K-ras4B细胞增殖受到抑制,与对照组比较差异显著(P<0.05);转染pCMV-RafCAAX质粒的pcDI-犤12Asp
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