多重胁迫下玉米实时定量PCR内参基因的筛选与验证

实时定量PCR(qPCR)技术广泛应用于基因表达量的检测,为了保证其结果的准确性,选择合适的内参基因是必不可少的环节。本研究分析了11个玉米候选内参基因的稳定性,其中7个是常用内参基因(GAPDH、ACT、EF-1α、γ-TUB、18S rRNA、5S rRNA和U6 snRNA),4个是microRNA(zma-miR171a、zma-miR171b、zma-miR172和zma-miR159a/b)。通过计算11个基因在正常生长条件与干旱、盐和碱共胁迫条件下的循环阈值(Ct),输入软件geNorm、Norm Finder和Best Keeper中进行分析。结果表明,microRNA比其他候选内参基因稳定,其中zma-miR172和zma-miR171a最稳定,18S rRNA最不稳定。另外,选择zma-miR397a及其靶基因LAC4对候选内参基因进行验证,发现不合适的内参基因可能会导致错误的结果。