猪链球菌2型MRP与EPF基因串联表达蛋白及其免疫保护作用

被引：24

作者：

李明

何孔旺

陆承平

机构：

[1] 南京农业大学/农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室

[2] 江苏省农业科学院兽医研究所/农业部畜禽疫病诊断重点开放实验室

来源：

中国农业科学 | 2005年 / 06期

关键词：

猪链球菌2型; 溶菌酶释放蛋白; 胞外蛋白因子; 融合表达; 中和表位;

D O I：

暂无

中图分类号：

S852.611 [];

学科分类号：

摘要：

根据猪链球菌2型(Streptococcussuistype2,SS2)溶菌酶释放蛋白(muramidase-releasedprotein,MRP)和胞外蛋白因子(extracellularproteinfactor,EPF)的基因序列,各设计合成一对引物,以猪链球菌2型江苏分离株SS2-1的基因组为模板,扩增mrp基因1801～2513位序列和epf基因1783～2563位序列,分别构建原核表达载体pET32a-mrp、pET32a-epf,确定诱导表达的两种蛋白都具有免疫原性后,提取阳性克隆质粒各自进行双酶切并纯化,通过PCR串联两片段,将目的片段定向克隆到表达载体pET-32a中,重组质粒转化入大肠杆菌BL21,经IPTG诱导表达分子量约为74kD的融合蛋白。用制备的两种抗血清与纯化融合蛋白进行免疫转印,结果显示融合蛋白分别具有MRP与EPF的中和表位。用融合蛋白MRP-EPF免疫新西兰兔,以最小致死量猪链球菌强毒株SS2-1攻击,兔的存活率达50%(2/4),存活率明显高于单个表达产物。证实串联表达的融合蛋白为重要的保护性抗原。

引用

页码：1264 / 1269

页数：6

共 6 条

[1] 猪链球菌2型毒力因子部分片段的克隆与表达 [J].