TaqMan实时荧光PCR快速检测斑点叉尾鮰病毒

被引：12

作者：

李惠芳 ^{[1
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刘荭 ^{[2
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吕建强 ^{[2
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蔡依娜 ^{[2
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田飞焱 ^{[1
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李香平 ^{[1
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岳志芹 ^{[3
]}

陈昌福 ^{[1
]}

机构：

[1] 华中农业大学水产学院

[2] 广东省深圳出入境检验检疫局

[3] 山东出入境检验检疫局

来源：

长江大学学报(自然科学版)农学卷 | 2008年 / 01期

基金：

国家高技术研究发展计划(863计划);

关键词：

斑点叉尾鮰(Ictalurus Punctatus)病毒; 实时荧光定量PCR; Taqman荧光探针; 检测;

D O I：

暂无

中图分类号：

S943 [各种鱼的病害、敌害及其防治];

学科分类号：

摘要：

根据GenBank登录的斑点叉尾鮰病毒株ORF8基因序列,设计引物和Taqman荧光探针,建立了用于检测斑点叉尾鮰(Ictalurus Punctatus)病毒的实时荧光定量PCR方法;对实时荧光定量PCR反应条件进行了优化,评估了该方法的特异性、灵敏度和重复性,并建立了绝对定量方法。特异性试验证实,该方法只能检测到斑点叉尾鮰病毒,与真鲷虹彩病毒、蛙虹彩病毒、锦鲤疱疹病毒、鳜鱼传染性脾肾坏死病毒等多种常见的水生动物病毒没有交叉反应,具有高度的特异性。标准曲线表明,在3.3×10～3.3×107拷贝数之间有较好的线性关系(r=0.998 3),最少可检测到33个拷贝的阳性质粒,敏感度很高。同一样品于试验内及试验间的重复性试验发现,变异系数分别为0.7%和1.2%,重复性较好。该方法的检测时间从核酸抽提到出具结果仅需3h。试验结果表明,采用实时荧光PCR检测斑点叉尾鮰病毒方法具有特异性好、灵敏度高、检测耗时短的特点,并且能对病毒进行准确的定量分析,不仅适合口岸进出口检验检疫的需求,而且可以作为研究该病毒感染过程的有力工具。

引用

页码：42 / 46+3+2 +3

页数：7

共 8 条

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