猪瘟兔化弱毒疫苗RT-LAMP检测方法的建立

被引：4

作者：

张兴娟 ^{[1
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韩秋影 ^{[1
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孙元 ^{[1
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李宏宇 ^{[1
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常天明 ^{[1
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石火英 ^{[2
]}

仇华吉 ^{[1
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机构：

[1] 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室猪传染病研究室

[2] 扬州大学兽医学院

来源：

中国兽医科学 | 2010年 / 40卷 / 07期

关键词：

猪瘟兔化弱毒疫苗; 猪瘟病毒; 反转录-环介导等温扩增; 检测;

D O I：

10.16656/j.issn.1673-4696.2010.07.009

中图分类号：

S858.28 [猪];

学科分类号：

摘要：

根据GenBank中登录的猪瘟病毒(CSFV)野毒株、猪瘟兔化弱毒疫苗(HCLV)和牛病毒性腹泻病毒(BVDV)的NS5B基因序列,利用在线软件Pri mer Explorer V4Software,设计了一套环介导逆转录等温核酸扩增(RT-LAMP)引物,建立了特异性检测HCLV的RT-LAMP方法。在BstDNA聚合酶作用下,65℃恒温反应1h即可完成扩增过程,扩增产物可通过20g/L琼脂糖凝胶电泳或加入SYBR GreenⅠ染料进行分析。经检测,该方法对于CSFV、BVDV以及其他猪源病毒无特异性扩增,具有良好的HCLV特异性;其灵敏度与本实验室建立的TaqMan实时荧光定量RT-PCR检测结果一致,均达到5个拷贝。分别用这两种方法对58份市售猪瘟弱毒疫苗进行检测,结果符合率达100%。表明,建立的HCLV RT-LAMP技术可以应用于基层实验室或养殖场,便于养殖户对疫苗中的弱毒含量进行监测。

引用

页码：701 / 707

页数：7

共 13 条

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