盐藻cbr基因启动子及其3'-非翻译区序列的克隆

目的:克隆盐藻cbr基因启动子和3’ -非翻译区(3’ -UTR)片段。方法:设计2对引物,通过2轮巢式PCR 反应,扩增cbr基因启动子,其中首轮PCR反应使用改良的降落PCR程序,第二轮巢式PCR反应的模板是第一轮 PCR产物,使用普通PCR程序;cbr基因3’ -UTR片段的克隆采用一对引物,通过一般PCR程序得到。结果:通过巢 式PCR得到长约1.1kb的cbr基因启动子片段,DNA测序结果表明碱基序列与文献记载完全相同,无任何碱基突 变;克隆的长0.3kb的cbr基因3’ -UTR片段经人工比较,与收录的序列吻合,无碱基突变。结论:利用普通Taq酶 对用PCR方法克隆得到了盐藻胡萝卜素生物合成相关基因cbr的2个基因表达调控序列;结合使用巢式PCR和改 良降落PCR,可以非常有效地克隆具有复杂二级结构的DNA片段;通过两端人工添加的限制序列,将cbr基因启动 子和3’ -UTR2个调控片段构建到同一个载体上,形成cbr基因表达盒,为构建转基因盐藻表达载体打下了基础。