茶树PPO融合蛋白真核表达载体的构建与表达

被引：2

作者：

王乃栋 ^{[1
,2
]}

张丽霞 ^{[1
,2
]}

黄晓琴 ^{[1
,2
]}

韩晓阳 ^{[1
,2
]}

李智 ^{[1
,2
]}

机构：

[1] 山东农业大学园艺科学与工程学院

[2] 作物生物学国家重点实验室

来源：

茶叶科学 | 2012年 / 32卷 / 03期

基金：

高等学校博士学科点专项科研基金;

关键词：

茶树; 多酚氧化酶; 融合蛋白真核表达载体; 巴斯德毕赤酵母; 诱导表达;

D O I：

10.13305/j.cnki.jts.2012.03.012

中图分类号：

S571.1 [茶];

学科分类号：

0902 ; 090203 ;

摘要：

以迎霜品种茶树基因组为模板,利用高保真聚合酶pfu,通过PCR方法扩增得到茶树PPO基因的编码区序列。通过设计酶切引物将其成功融合至真核表达载体pPICZa中,构建出茶多酚氧化酶的融合蛋白真核表达载体pPICZa-PPO,并将其转化进入巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)GS115中,成功筛选出多个阳性转化子。对阳性转化子进行甲醇诱导,采用Western-Blotting方法在培养液中成功检测到诱导表达的目的蛋白。酶活检测结果也显示诱导产物具有较高的相对酶活性,能够正确发挥酶蛋白的生物功能。

引用

页码：269 / 275

页数：7

共 12 条

[1] TCA-丙酮沉淀法提取聚合草叶蛋白的研究 [J].

董双涛 ;

李宝霞 ;

霍乃蕊 .

世界中西医结合杂志, 2011, 6 (09) :766-767+828

[2] 毕赤酵母蛋白表达系统研究进展 [J].

杨梅 ;

温真 ;

林丽玉 ;

杨彩云 .

生物技术通报, 2011, (04) :46-51

[3] 茶树多酚氧化酶基因的生物信息学分析及原核表达 [J].

王乃栋 ;

张丽霞 ;

向勤锃 ;

李巍巍 .

茶叶科学, 2011, 31 (01) :33-39

[4] 6His-VP3融合蛋白的表达、纯化及其捕获细胞中相关蛋白的初步探讨 [J].

王阿慧 ;

孙军 ;

毕昊 ;

彭冬君 ;

田俊 ;

狄勇 ;

宗义强 ;

屈伸 .

医学分子生物学杂志, 2007, (02) :112-115

[5] 融合蛋白基因工程应用及研究 [J].

张毅 ;

屈贤铭 ;

杨胜利 .

生物工程进展, 2000, (03) :13-17+12

[6] 一种值得注意的基因表达系统——巴斯德毕赤氏酵母 [J].

戴秀玉 .

微生物学报, 1997, (06) :483-485

[7] 新型双分子细胞因子融合蛋白研究进展 [J].

刘劼，马大龙 .

生物化学与生物物理进展, 1994, (03) :194-196+280

[8]

High-level expression of biologically active glycoprotein hormones in Pichia pastoris strains—selection of strain GS115, and not X-33, for the production of biologically active N-glycosylated 15 N-labeled phCG[J] . Véronique Blanchard,Rupali A. Gadkari,Albert V. E. George,Satarupa Roy,Gerrit J. Gerwig,Bas R. Leeflang,Rajan R. Dighe,Rolf Boelens,Johannis P. Kamerling.Glycoconjugate Journal . 2008 (3)

[9]

Specific expression of GFP uv -β1,3- N -acetylglucosaminyltransferase 2 fusion protein in fat body of Bombyx mori silkworm larvae using signal peptide[J] . Tatsuya Kato,Enoch Y. Park.Biochemical and Biophysical Research Communications . 2007 (3)

[10]

pET-prof, a plasmid for high-level expression of recombinant peptides fused to a birch profilin-derived hexadecapeptide tag: A system for the detection and presentation of recombinant antigens[J] . Budhi Pandjaitan,Petra Bettina Eibensteiner,Susanne Vrtala,Brigitte Hayek,Monika Grote,Rudolf Reichelt,Helmut Rumpold,Rudolf Valenta,Susanne Spitzauer.Gene . 1999 (2)

← 1 2 →