黑木耳漆酶基因在毕赤酵母中的表达及其酶学性质研究

被引：5

作者：

高键

李杰

机构：

[1] 东北农业大学生命科学学院

来源：

东北农业大学学报 | 2009年 / 40卷 / 08期

关键词：

漆酶基因; 信号肽; 巴斯德毕赤酵母; 分泌表达;

D O I：

10.19720/j.cnki.issn.1005-9369.2009.08.013

中图分类号：

S646 [菌类（食用菌）];

学科分类号：

摘要：

应用SignalP 3.0 Server软件对黑木耳漆酶基因lac1(GenBank No.AY450405)编码的蛋白质序列进行分析,发现在其N端存在18个氨基酸的信号肽序列。通过RT-PCR克隆了lac1基因,分别构建带有自身信号肽的lac1基因毕赤酵母表达载体pPICN-lac1和以α因子信号肽替换自身信号肽的lac1基因毕赤酵母表达载体pPIC9-lac。将这两个载体转化巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)GS115细胞,获得基因工程菌GS115-pPICN-lac1与GS115-pPIC9-lac。SDS-PAGE分析和酶活性测定结果表明,在转化后者中漆酶基因得到了有效分泌表达,而在转化前者中漆酶基因未能得到有效分泌表达。进一步研究确定GS115-pPIC9-lac菌株液体发酵的最适pH为4.0,在此发酵条件下,其分泌表达的漆酶最高酶活为0.149U·mL-1。酶学性质研究表明,该酶的最适反应温度为40℃,最适反应pH为5.0,在最适反应条件下其pH稳定性和热稳定性均较好。

引用

页码：58 / 62

页数：5

共 6 条

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