高血脂、肝素对乙型肝炎病毒DNA实时荧光定量PCR测定干扰机制的探讨

目的探讨高血脂、肝素对乙型肝炎病毒基因实时荧光定量PCR(HBVDNA-FQ-PCR)测定的干扰机制。方法将己经确诊的乙肝大三阳志愿者的高脂血和非脂血、肝素抗凝血和未抗凝血用实时荧光定量PCR做HBVDNA定量测定并同时做定性测定,另外将同一份乙肝大三阳标本五种不同浓度肝素抗凝,另一份不抗凝,然后分别用HBVDNA-FQ-PCR和琼脂糖凝胶电泳-溴乙锭显色法做HBVDNA定量和定性测定。结果5份非脂血和相应的高脂血HBVDNA定量结果有非常显著性差异(P<0.01),定性结果两者没有差异全部为阳性(5/5)。5份用1 500 U/ml肝素抗凝血HBVDNA定量结果都为0,定性结果都为阴性,而相应未抗凝血定量结果分别为6.35E+8,5.21E+6,7.05E+8,2.98E+7,6.33E+6,定性结果肝素抗凝和未抗凝标本都为阳性(5/5)。五种不同浓度肝素抗凝标本的HBVDNA定量结果,当肝素浓度大于1 000 U/ml时定量结果为0,肝素浓度小于100 U/ml对HBVDNA-FQ-PCR测定结果影响不大,相应的对照HBVDNA拷贝数为7.32+8E,不同浓度肝素抗凝标本的HBVDNA定性结果,当肝素浓度大于500 U/ml为阴性,小于100 U/ml为阳性。结论高血脂对HBVDNA实时荧光定量PCR的干扰机制主要是血液中的低密度脂肪(乳糜微粒等)对荧光的屏蔽或吸收作用,肝素对HBVDNA实时荧光定量PCR的干扰机制是肝素对Taq酶的抑制作用。