经基因工程改造的花生主要过敏原Ara h 2制备及其低致敏原性鉴定

被引：3

作者：

易海涛 ^{[1
,2
]}

刘芳 ^{[3
]}

贾梦阳 ^{[4
]}

汤慕瑾 ^{[5
]}

曹小勇 ^{[6
]}

夏立新 ^{[2
,4
]}

刘志刚 ^{[2
,4
]}

机构：

[1] 深圳大学生命科学学院

[2] 深圳大学医学院过敏反应与免疫学研究所

[3] 新疆华世丹药业股份有限公司

[4] 深圳大学医学院

[5] 深圳市出入境检验检疫局

[6] 福田区妇幼保健院

来源：

江西农业大学学报 | 2011年 / 33卷 / 05期

关键词：

基因工程; 花生; 过敏原; Arah2; 低致敏;

D O I：

10.13836/j.jjau.2011178

中图分类号：

S565.2 [花生];

学科分类号：

0901 ;

摘要：

构建经基因工程改造的Ara h 2表达载体,表达并纯化该蛋白,鉴定其过敏原性。将花生主要过敏原Arah 2基因序列进行颠换,并将颠换后的序列进行合成,再将合成后的基因克隆到原核表达载体pET-32a(+)上,然后转入Origami宿主表达菌中;利用Isopropylβ-D-1-Thiogalactopyranoside(IPTG)诱导表达;通过Ni2+亲和层析纯化目的蛋白;Western blotting和ELISA鉴定该重组蛋白的过敏原性。测序结果表明合成后的序列成功整合到原核表达载体pET-32a(+)上。重组的目的蛋白纯化后经SDS-PAGE鉴定,蛋白大小与理论值相符。Western blotting和ELISA结果均表明经基因工程改造的Ara h 2(F-Ara h 2)蛋白与重组的Ara h 2(R-Ara h 2)蛋白相比,结合花生过敏患者混合血清中IgE显著降低。成功构建经基因工程改造的Ara h 2表达载体,初步的体外实验表明该基因表达的重组蛋白具有低致敏原性。

引用

页码：993 / 998

页数：6

共 14 条

[1] 小龙虾钙结合蛋白基因表达及纯化 [J].

魏波 ;

夏立新 ;

陈红兵 ;

邬玉兰 ;

刘志刚 .

江西师范大学学报(自然科学版), 2010, 34 (06) :567-571

[2] 花生过敏原Ara h2.02的克隆、表达及免疫学鉴定 [J].

易海涛 ;

刘志刚 ;

闫浩 ;

刘芳 ;

赵郭存 ;

夏立新 .

江西师范大学学报(自然科学版), 2010, 34 (05) :531-535

[3] 牛乳主要过敏原α-乳白蛋白基因的克隆及其原核表达载体的构建 [J].

闫浩 ;

邬玉兰 ;

夏立新 ;

刘志刚 .

江西师范大学学报(自然科学版), 2010, 34 (03) :244-248

[4] 花生过敏原Ara h2与Ara h6的生物信息学比较研究 [J].

夏立新 ;

闫浩 ;

汤慕瑾 ;

朱海 ;

刘志刚 .

深圳大学学报(理工版), 2010, 27 (02) :241-246

[5] 过敏原特异性IgE检测芯片的制备及初步应用 [J].

胡洁 ;

朱有名 ;

韩金祥 ;

吴坚美 ;

吴围屏 .

中华检验医学杂志, 2006, (03) :236-238

[6] 我国常用食品致喘40例分析 [J].

叶世泰 ;

傅阳心 .

中华医学杂志, 1986, (07)

[7]

Sublingual immunotherapy for peanut allergy: Clinical and immunologic evidence of desensitization[J] . Edwin H. Kim,J. Andrew Bird,Michael Kulis,Susan Laubach,Laurent Pons,Wayne Shreffler,Pamela Steele,Janet Kamilaris,Brian Vickery,A. Wesley Burks.The Journal of Allergy and Clinical Immunology . 2011 (3)

[8] Designing hypoallergenic derivatives for allergy treatment by means of in silico mutation and screening [J].