青蒿琥酯上调血红素氧合酶-1对脓毒症小鼠急性肺损伤的作用研究

目的探讨青蒿琥酯(artesunate,AS)能否上调血红素氧合酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)对脓毒症小鼠急性肺损伤(ALI)起到保护作用。方法本实验于哈尔滨医科大学附属第一医院外科中心实验室完成。60只雄性昆明小白鼠,随机(随机数字法)分为假手术组(Sham组,n=15)、模型组(CLP组,n=15)、青蒿琥酯干预组(AS+CLP组,n=15)和HO-1抑制剂组(AS+ZnPP+CLP组,n=15)。采用改良盲肠结扎穿孔(CLP)法制备脓毒症模型,青蒿琥酯干预组,造模前2h经腹腔注射青蒿琥酯(15 mg/kg),HO-1抑制剂ZnPP(40μmol/kg)则在给予青蒿琥酯1 h后经腹腔注射,其余各组小鼠给予等体积生理盐水。于术后24 h处死小鼠,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清炎症介质(TNF-α、IL-6)变化情况。通过测定肺脏湿/干(W/D)质量比检测肺水肿情况,采用HE染色观察肺组织病理损伤情况。采用蛋白印迹以及免疫组化法检测肺组织HO-1的表达情况,并且通过蛋白印迹法检测HO-1的上游调节转录因子核因子E2相关因子2(Nrf-2)的表达情况。组间多重比较采用单因素方差分析,两两比较采用SNK-q(StudentNewman-Keuls)法,以P<0.05为差异具有统计学意义。结果与Sham组比较,CLP组血清炎症介质TNF-α(pg/mL)(54.37±15.59 vs.627.45±117.03,P<0.05)、IL-6(pg/mL)(81.53±26.89vs.898.52±222.78,P<0.05)释放增加,蛋白渗出明显,肺水肿(肺脏W/D比值:4.27±0.22vs.6.78±0.73,P<0.05)和肺脏病理损伤(肺损伤评分:2.20±0.2 vs 13.25±2.67,P<0.05)均加重。肺组织中HO-1、Nrf-2蛋白表达含量增加(P<0.05)。给予AS干预后,与CLP组比较,血清炎症介质TNF-α(pg/mL)(627.45±117.03 vs.307.88±72.33,P<0.05)、IL-6(pg/mL)(898.52±222.78 vs.413.47±115.14,P<0.05)释放减少,蛋白渗出减少,肺水肿减轻(肺脏W/D比值:6.78±0.73 vs 5.05±0.61,P<0.05),肺脏病理损伤减轻(肺损伤评分:13.25±2.67vs.4.95±1.46,P<0.05)。肺组织HO-1、Nrf-2蛋白表达含量明显增加(P<0.05),而AS对于脓毒症小鼠肺组织的上述保护作用被HO-1抑制剂ZnPP所逆转,HO-1抑制剂组肺脏损伤情况与CLP组相当(肺损伤评分:12.15±2.95 vs.13.25±2.67,P>0.05;肺W/D比值:6.78±0.73 vs.6.29±0.82,P>0.05)。结论 AS对脓毒症诱发的ALI小鼠具有保护作用,其作用通路可能与上调HO-1减轻肺组织炎症反应,继而减轻肺损伤有关。