纳豆激酶基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达

利用ＰＣＲ方法以分泌纳豆激酶的纳豆杆菌染色体ＤＮＡ为模板扩增纳豆激酶基因，将该基因克隆到质粒载体ＰＵＣ１９上，筛选重组子，通过限制性内切酶和ＰＣＲ技术分析初步确定该重组子所携外源基因为纳豆激酶基因。利用基因重组技术构建了纳豆激酶基因的表达载体，并在大肠杆菌中进行了表达，凝块溶解时间法（ＣＬＴ）测出表达产物具有溶解血栓活性。在确定了最佳培养时间与诱导时间后，ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析结果表明基因表达产物为分泌型，蛋白表达量占菌体蛋白的１２％左右。