用磁珠富集法分离亚麻基因组微卫星分子标记

被引:17
作者
邓欣 [1 ]
陈信波 [1 ,2 ]
龙松华 [1 ]
王孝纯 [3 ]
高原 [1 ,2 ]
何东锋 [1 ,2 ]
王进 [1 ]
王玉富 [1 ]
机构
[1] 中国农业科学院麻类研究所/农业部麻类遗传改良与工程微生物重点实验室
[2] 湖南农业大学/作物基因工程湖南省重点实验室
[3] 黑龙江大学资源与环境研究室
关键词
亚麻; 微卫星; 磁珠富集;
D O I
暂无
中图分类号
S563.2 [亚麻];
学科分类号
0901 ;
摘要
应用Dynal磁珠-生物素标记的微卫星探针(CT)15与亚麻基因组DNA酶切片段杂交,捕获300~1500bp含有微卫星序列的DNA片段,连接到pMD18-T载体中,构建富集微卫星序列的小片段插入文库。利用接头引物和根据微卫星核心序列设计的引物VRV(CT)15使用PCR方法直接对文库筛选,从422个转化子中获得了104个阳性克隆,对其进行测序分析,获得了97个微卫星序列,微卫星序列的富集效率达到22.99%,PCR扩增筛选效率93.27%。对97个微卫星序列进行比对分析,其中51个重复序列的两端序列高度相似,据其设计的特异引物对阳性克隆进行2次筛选,能淘汰相似度高的同类序列,提高筛选亚麻微卫星标记的效率。
引用
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页码:2099 / 2105
页数:7
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