HPLC-MS/MS法同时测定山银花中7个有机酸的含量

目的:建立HPLC-MS/MS法同时测定山银花中7个有机酸（新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸、3,4-二-O-咖啡酰奎宁酸、3,5-二-O-咖啡酰奎宁酸和4,5-二-O-咖啡酰奎宁酸）的含量,并对其在3种不同植物来源的药材中的含量进行比较。方法:采用Shiseido Capcell Pak-C18色谱柱（4.6 mm×250 mm,5μm）,以0.1%甲酸水溶液（A）-乙腈（B）为流动相,梯度洗脱,流速为1 mL·min-1,加柱后分流器,使约30%洗脱液进入质谱仪,柱温30℃,进样量5μL;质谱采用ESI-多反应监测（MRM）模式扫描,以水杨酸为内标,脱溶剂温度350℃,脱溶剂气流（N2）600 L·h-1,雾化器压力0.2 MPa,毛细管电压4 kV。结果:新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸、3,4-二-O-咖啡酰奎宁酸、3,5-二-O-咖啡酰奎宁酸和4,5-二-O-咖啡酰奎宁酸质量浓度分别在0.032～32.224μg·mL-1（R2=0.999 5）、0.168～16.800μg·mL-1（R2=0.999 4）、0.038～15.104μg·mL-1（R2=0.999 8）、0.010～4.064μg·mL-1（R2=0.999 2）、0.013～5.372μg·mL-1（R2=0.999 5）、0.079～39.840μg·mL-1（R2=0.999 5）和0.041～16.208μg·mL-1（R2=0.999 3）范围内线性关系良好;定量限（LOQ）为10.0～19.9 ng·mL-1,平均回收率在94.01%和105.0%之间。样品测定结果显示,山银花中绿原酸和3,5-二-O-咖啡酰奎宁酸含量较高,分别为1.262%7.408%和0.636%4.803%;咖啡酸含量较低,为0.003%0.022%。通过比较不同植物来源的样品,发现其在有机酸的含量和比例方面存在较大差异。结论:本实验建立的方法灵敏、准确,可用于山银花药材中有机酸的含量测定,测定结果可为该药材质量标准的完善提供依据。