燕麦AFLP反应体系的建立与优化

在利用扩增片断长度多态性(AFLP)技术研究燕麦Avena sativa遗传多样性过程中,从引物筛选、酶切连接、扩增条件、检测方法等几个方面进行优化,建立燕麦AFLP最适反应体系为:800 ng/μL DNA用10U EcoRⅠ和4 U MseⅠ在37℃7 h,65℃4 h温浴双酶切;16℃下连接过夜;预扩增取连接产物1μL,10μmol/L预扩引物各0.6μL,10×buffer 2μL,dNTPS 2μL,ddH2O补平至20μL;取5μL稀释20倍后的预扩增产物,50 ng/μL EcoRⅠ、MseⅠ选扩引物各0.8μL,总体系20μL进行选择性扩增。在此优化体系下,可以得到重复性好、稳定且多态性高的燕麦AFLP条带。