青梅果超氧化物歧化酶粗酶的提取及活性研究

[目的]测定青梅果超氧化物歧化酶(SOD)活性,筛选青梅果SOD粗酶提取最有效的方法。[方法]以重庆綦江青梅果为原料,采取不同料液比提取青梅SOD粗酶,以Sevage法除去杂蛋白,硫酸铵分级沉淀。同时对各步骤所得SOD粗酶活性、蛋白量、比活的检测结果进行比较。[结果]H3PO4缓冲液的用量对SOD粗酶的提取有直接影响。当H3PO4缓冲液与梅果的比例为3∶1时,测得酶的比活最高,为25.34 U/mg蛋白;粗酶液按3∶1体积比加入的氯仿-乙醇混合液除去杂蛋白效果明显;粗酶液添加(NH4)2SO4至90%饱和度沉淀SOD效果好,比活较提取液上升51.43 U/mg蛋白。[结论]青梅果SOD粗酶提取的最佳条件:H3PO4缓冲液与青梅比例为3∶1,温度为25～30℃,pH值为7.8,Sevage法除去杂蛋白,(NH4)2SO4盐析从35%添加至90%饱和度沉淀SOD。该条件下,总蛋白为215.13mg,酶总活力为5 415.74 U/mg蛋白,比活为25.34 U/mg蛋白。