人miR-147a真核表达载体的构建及其对肺癌细胞增殖和侵袭的影响

被引：7

作者：

于洋 ^{[1
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赵健 ^{[2
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钟铠泽 ^{[2
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刘春艳 ^{[1
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李艺 ^{[3
]}

史婧 ^{[3
]}

陈蔚文 ^{[1
]}

姜安丽 ^{[1
]}

机构：

[1] 山东大学医学院生物化学与分子生物学研究所

[2] 山东大学齐鲁医院胸外科

[3] 山东大学医学院

来源：

山东大学学报(医学版) | 2012年 / 50卷 / 12期

关键词：

microRNA; miR-147a; 肺肿瘤; 增殖; 侵袭;

D O I：

暂无

中图分类号：

R734.2 [肺肿瘤];

学科分类号：

100214 ;

摘要：

目的构建人miR-147a真核表达载体,检测其在肺腺癌细胞A549中的表达及对细胞增殖和侵袭能力的影响。方法以A549细胞总RNA为模板,RT-PCR扩增miR-147a的前体序列(pri-mir-147a),插入表达载体pSi-lencer4.1-CMV neo,构建pSilencer4.1-147a重组载体,转染A549细胞,qRT-PCR和报告基因分析检测miR-147a的表达;MTT分析检测外源性miR-147a过表达对A549细胞增殖能力的影响;Matrigel侵袭实验检测外源性miR-147a过表达对A549细胞侵袭能力的影响;报告基因分析检测miR-147a对常见肿瘤信号途径的影响。结果限制性酶切和DNA测序证实pSilencer4.1-147a构建正确;pSilencer4.1-147a转染A549细胞后,qRT-PCR和报告基因分析检测到明显的外源性miR-147a表达;MTT分析和Matrigel侵袭实验结果显示,miR-147a过表达可明显抑制A549细胞的增殖和侵袭能力;报告基因分析结果显示,miR-147a过表达可显著下调pGL4.23-AP1、pGL4.23-ELK1、pGL4.23-cMYC的相对荧光素酶活性。结论成功构建的人miR-147a真核表达载体能够在肺腺癌细胞A549中有效表达,并对A549细胞的增殖和侵袭产生抑制作用,该作用可能与miR-147a对EGFR-RAS-MAPK途径的抑制有关。

引用

页码：25 / 30

页数：6

共 21 条

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