酶切过程中肽段过烷基化对蛋白质定性和定量分析的影响

被引：4

作者：

王继峰 ^{[1
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赵新元 ^{[1
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赵焱 ^{[2
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马成 ^{[2
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钟儒刚 ^{[1
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钱小红 ^{[1
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应万涛 ^{[2
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机构：

[1] 北京工业大学生命科学与生物工程学院

[2] 蛋白质组学国家重点实验室,北京蛋白质组研究中心,北京放射医学研究所

来源：

色谱 | 2013年 / 10期

关键词：

液相色谱; 质谱; 多反应监测; 蛋白质组学; 烷基化; 碘乙酰胺;

D O I：

暂无

中图分类号：

Q51 [蛋白质];

学科分类号：

摘要：

蛋白质的还原-烷基化是蛋白质酶切中的重要步骤,常用的烷基化试剂是碘乙酰胺(IAA),但是IAA除了和半胱氨酸发生反应,也可能和其他多种氨基酸发生副反应。我们模拟常规的酶切条件,系统地研究了蛋白质真实酶切时所有酶切肽段发生烷基化的情况。结果表明,多种氨基酸可以发生烷基化,其趋势为:半胱氨酸>肽段N端氨基酸>天冬氨酸>谷氨酸>组氨酸>天冬酰胺>赖氨酸>酪氨酸,同时也发现同一肽段上的氨基酸烷基化具有排他性和聚集性。根据定性结果,采用质谱多反应监测(MRM)技术对多个肽段进行了定量分析,评估了过烷基化对蛋白质定量分析的影响。该研究结果表明,过量的烷基化修饰对蛋白质的定性与定量分析都可能产生较大影响。在蛋白质组学研究的样本处理流程中,应避免样本的过烷基化。

引用

页码：927 / 933

页数：7

共 8 条

[1]

新型鳞片状聚合物修饰硅胶填料固定化酶的制备及其在蛋白质组鉴定中的应用[J]. 宋子凤,张庆林,张养军,秦伟捷,钱小红. 色谱. 2012(06)

[2] Identification of consistent alkylation of cysteine-less peptides in a proteomics experiment [J].