草鱼酸性磷酸酯酶的性质及金属离子对其活性的影响

以草鱼肝脏为材料提取一种酸性磷酸酯酶(ACPase,EC.3.1.3.2),进一步用(NH4)2SO4沉淀分离,Sephadex G-200柱纯化,经聚丙烯酰胺凝胶电泳纯度鉴定呈现单一酶蛋白带,该酶紫外吸收峰为240nm和280nm,等电点为4.8,相对分子质量为100046.1。该酶水解对硝基苯磷酸二钠(pNPP)的最适pH值为4.4,最适温度为45℃,并有热激活现象,热激活温度为60℃。耐热实验表明,该酶在最适温度下耐热时间为33min,最适温度下20min时表现出最大活性。在60℃下耐热时间为25min,15min时表现最大活性。酶促反应初速度为0.0475μmol/min,最大反应速度为0.153μmol/min。米氏常数Km值为3.56×10-3mol/L。金属离子对酶活性影响的研究结果表明,K+对酶有激活作用,Li+、Na+对酶的活性没有明显影响;碱土金属离子Mg2+、Ca2+和Ba2+对酶有激活作用,其激活程度由大到小依次为:Ba2+、Mg2+、Ca2+;Mn2+对酶有激活作用,Zn2+、Cu2+、Co2+则有抑制作用;重金属离子Hg2+、Pb2+、Ag+和Cd2+对酶有抑制作用,其中Hg2+的抑制效应最强。Mg2+和Cu2+的作用机制研究结果表明,Mg2+对酶具有混合型激活作用,Cu2+对酶具有竞争性抑制作用。