基于PI3K/Akt/HIF-1α通路探讨桂枝茯苓胶囊-散结镇痛胶囊-宫血宁胶囊联用抑制子宫腺肌病进展的作用机制

目的 探究桂枝茯苓胶囊-散结镇痛胶囊-宫血宁胶囊联用（GSG）方案对人子宫腺肌病异位内膜衍生细胞（adenomyosis derived cells,AMDC）异常增殖的抑制作用，评价对子宫腺肌病（adenomyosis,AM）模型小鼠的改善效果，并探讨相关分子机制。方法 提取AMDC原代细胞并培养，采用CCK-8法检测GSG对AMDC活力的影响；采用克隆形成实验、EdU增殖检测实验确定GSG对AMDC克隆形成和增殖能力的影响。新生ICR小鼠滴喂他莫昔芬制备AM模型，分为对照组、模型组、复方米非司酮（3.25 mg/kg）组和GSG低、中、高剂量（0.635、1.270、2.539 g/kg）组，给药干预后，采用苏木素-伊红（hematoxylin-eosin,HE）染色观察小鼠子宫、肝、脾和肾的形态学改变；免疫组化法检测子宫组织中磷酸化磷脂酰肌醇3-激酶（phosphorylated phosphatidylinositol 3-kinase,p-PI3K）、磷酸化蛋白激酶B(phosphorylated protein kinase B,p-Akt)和缺氧诱导因子-1α(hypoxia-induciblefactor-1α,HIF-1α)的表达；检测血清中丙氨酸氨基转移酶（alanine aminotransferase,ALT）活性和血尿素氮（blood urea nitrogen,BUN）水平。结果 GSG能有效抑制AMDC活力和克隆形成能力，并呈剂量相关性地抑制AMDC增殖能力（P<0.001）。子宫HE染色结果显示，模型组子宫内膜与肌层边界模糊，多处腺体深度侵入子宫肌层；GSG低剂量组边界欠清晰，有腺体侵入子宫肌层，浸润深度减轻，数量减少；复方米非司酮组和GSG中剂量组边界较清晰，偶见腺体侵入肌层；GSG高剂量组边界清晰，少见明显腺体侵入肌层。免疫组化结果表明，与对照组比较，模型组子宫组织p-PI3K、p-Akt和HIF-1α表达显著增加（P<0.01、0.001）；与模型组比较，各给药组p-PI3K、p-Akt的表达显著降低（P<0.01、0.001），复方米非司酮组和GSG中、高剂量组HIF-1α的表达显著降低（P<0.05、0.01）。各组肝、脾和肾形态学均未见明显改变，血清ALT活性和BUN水平无显著性差异。结论 GSG方案在体内实验中可通过抑制PI3K/Akt/HIF-1α通路阻断AM进展，所选GSG剂量在动物体内未见明显不良反应，是潜在的AM治疗方案。