杜香化学成分及抗炎止痛作用研究

杜香(Ledum palustre L.var.palustre)系杜鹃花科植物,主要分布在我国东北的长白山和大小兴安岭等地区,野生杜香资源丰富。杜香含有丰富的次生代谢产物,具有药用和芳香价值,是极具利用潜力的资源植物。 本文首先对杜香及其变种宽叶杜香(Ledum palustre L.var.dilatatum Wahl.)进行系统的植化分析,并确立了在同一系统中提取杜香挥发油和杜香黄酮的技术路线。其工艺方法具体为:将杜香枝叶用水蒸气蒸馏后,残渣烘干,用热醇浸提法进一步提取杜香黄酮类化合物,得到的提取液合并浓缩,过大孔树脂柱纯化。通过正交实验法优化,最终的技术参数为:热醇提取,乙醇浓度60%,提取温度80℃,溶剂体积40倍,提取4次,每次1h;浓缩浸膏用Hpd600树脂过柱纯化,选择加样量/大孔树脂投量比1:20,吸附时间4 h,洗脱体积/柱体积比3倍,乙醇浓度60%,流速7 mL/min。用此方法提取、纯化杜香黄酮,最终晶体得率为1.7g/100g生药,晶体中黄酮纯度为88.0%。 杜香黄酮和杜香精油分别用高效液相色谱法及气相色谱-质谱联用技术进行鉴定分析。高效液相色谱法比对发现杜香中含有芦丁、杨梅素、槲皮素、山柰酚4种黄酮类化合物,生药中黄酮总量达119.0±13.7 g/kg干重。宽叶杜香除以上4种化合物外还含有少量异鼠李素,生药中黄酮总量达168.2±16.7 g/kg干重。 气相色谱-质谱法鉴定的杜香精油主要成分有:对-伞花烃(26.54%),8-羟基-对-伞花烃(3.41%),1-乙烯基环己醇(3.14%)等55种。宽叶杜香精油的主要成分有:对-伞花烃(23.97%),4-萜品醇(7.28%),1-乙烯基环己醇(2.42%),beta-萜品烯(1.50%),(+)-4-蒈烯(1.43%)等49种。包括烃类、醇类、酯类、醛类、酚类、环氧化合物和过氧化物7类,通过归纳分析,可以将所有组分按其主要碳骨架结构分成5种。尽管植物生长的地理环境、气候条件、采摘时间和提取方法都会对植物挥发油组分产生较大的影响,但同种植物挥发油组分的基本碳骨架结构是相同的。以气相色谱-质谱为平台,归纳不同来源挥发油组分的碳骨架结构和特征峰,既能获得同种植物挥发油的基本组成,又能针对不同来源、不同加工工艺的样品以细致区分。 杜香是传统的药用植物,但针对其各提取部分的物质基础及现代药理药效分析尚未有充分、系统的研究。本实验通过醋酸诱导小鼠扭体反应模型和角叉菜胶诱导小鼠足趾肿胀模型比较杜香不同提取部位的急性镇痛、抗炎作用,以期用现代生物学手段在其传统用法基础上找到新的有效部位和新的适用症。结果显示,甲醇提取物(10.0 mg/kg、1.0 mg/kg)和水提物(10.0 mg/kg)能显著抑制醋酸引起的小鼠扭体反应和角叉菜胶引起的小鼠足趾水肿。水提物(10.0 mg/kg)在致炎后2-4h内效果接近非甾醇类抗炎药吲哚美辛。高效液相色谱结果提示甲醇提取物的镇痛抗炎效果可能通过其所含黄酮类化合物实现。 后续工作将进一步分离杜香黄酮类化合物,以阐明其药效的物质基础。并围绕黄酮类化合物已知的生物活性,开展现代药理学研究,充分挖掘杜香的药用价值。