葡萄渣中反式白藜芦醇的提取纯化及其清除自由基能力的研究

本实验以生产葡萄酒后的副产物——葡萄渣为原料,从中提取具有多种生理功能的反式白藜芦醇。对反式白藜芦醇的提取条件、纯化方法和清除自由基能力进行了研究,为葡萄渣的开发利用提供理论依据。 反式白藜芦醇的检测方法采用紫外分光光度法和高效液相色谱法。采用紫外分光光度法测定时,确定出最佳吸收波长为306nm,并得出了标准曲线的回归方程为:y=0.1122x-0.0132（R2=0.9991）,浓度范围为0～8μg/mL;采用高效液相色谱法测定时,所用的色谱条件是:流动相为甲醇-水溶液（50:50,v/v）、流速为0.8mL/min、进样量为10μL、柱温为室温,所得到的反式白藜芦醇标准品的色谱图峰形比较好,且所得出的标准曲线的回归方程为:y=60297x-10418（R2=0.9997）。反式白藜芦醇浓度在0.5μg/mL20μg/mL的范围内呈良好的线性关系,最低检测限为0.5μg/mL。 采用80%甲醇、80%乙醇、80%丙酮和乙酸乙酯等有机溶剂对葡萄渣进行了提取,结果表明80%乙醇对反式白藜芦醇的提取效果比较好。 在对提取条件进行优化的过程中,采用了三因素三水平的响应面分析方法。最佳提取条件结果为:温度69℃、时间61min、液固比46mL/g,其理论最大提取含量为104.39μg/g,经过验证实验所得到的实际提取含量为103.86μg/g。各因素影响程度从大到小依次排列为液固比>提取时间>提取温度。 采用大孔吸附树脂法和碱提酸沉法对反式白藜芦醇进行了纯化工艺的研究。大孔吸附树脂法中选择了用AB-8树脂来分离纯化,其在4h左右基本完成对反式白藜芦醇的吸附;当反式白藜芦醇的浓度为70.6μg/mL时,AB-8树脂的吸附效果好;对吸附后的AB-8树脂采用75%的乙醇溶液、以流速0.75 BV/h进行解吸,大约需消耗5.5BV左右的解吸剂就基本能把反式白藜芦醇解吸出来;所得到的反式白藜芦醇初产品纯度为26.32%。碱提酸沉法中最后采用pH=12的NaOH溶液进行提取,并用HCl溶液调整到溶液pH=3。最终产品经定性检测,确定其中含有反式白藜芦醇,而且经过HPLC法测定,得出其纯度达到59.88%。 对反式白藜芦醇清除羟自由基和DPPH自由基进行了研究,结果表明:反式白藜芦醇提取物对自由基有一定的清除作用,且清除能力的强弱依赖于反式白藜芦醇的浓度。本实验中所用的浓度范围内,浓度越大,清除作用越强。