目的:研究黄精多糖(Pohygonatum Sibiricmu Polyxaccharides, PSP)预处理对乳鼠心肌细胞缺氧/复氧(Anoxia/Reoxygenation, A/R)损伤的保护作用及其机制。
方法:实验用SD新生大鼠(出生1～3d),雌雄不拘,常规方法培养心肌细胞,在培养48h后随机分为4组:正常对照组(Control组)、缺氧/复氧组(A/R组)、缺氧预处理(Anoxia Preconditioning, APC)组(APC+A/R组,3次短暂缺氧复氧,再进行A/R操作)、PSP预处理组(PSP+A/R组)。对以下指标进行检测:①细胞存活率(MTT法);②试剂盒检测培养液中乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)活性以及脂质过氧化产物丙二醛(MDA)含量;③流式细胞仪检测心肌细胞凋亡率;④流式细胞仪检测心肌细胞内游离钙离子浓度。
结果:①细胞存活率:A/R组(43.18±3.10%)显著低于Control组(94.22±1.56%)、APC+A/R组(72.98±2.94%)、PSP+A/R组(69.82±3.17%)(均p<0.01);APC+A/R组与PSP+A/R组相比,无显著性差异(p>0.05)。②培养液中LDH活性:A/R组(53.51±2.92U/L)显著高于Control组(11.29±1.35U/L)、APC+A/R组(21.35±1.38U/L)、PSP+A/R组(23.35±1.98U/L)(均p<0.01);APC+A/R组与PSP+A/R组相比,无显著性差异(p>0.05)。③培养液中SOD活性:A/R组(6.34±0.95U/L)显著低于Control组(13.84±1.36U/L)、APC+A/R组(11.59±1.67U/L)、PSP+A/R组(12.25±1.88U/L)(均p<0.01);APC+A/R组与PSP+A/R组相比,无显著性差异(p>0.05)。④培养液中MDA含量:A/R组(1.68±0.16μmol/L)显著高于Control组(0.42±0.09μmol/L)、APC+A/R组(0.81±0.09μmol/L)、PSP+A/R组(0.79±0.08μmol/L)(均p<0.01);APC+A/R组与PSP+A/R组相比,无显著性差异(p>0.05)。⑤心肌细胞凋亡率:A/R组(34.27±1.94%)显著高于Control组(6.62±0.68%)、APC+A/R组(14.35±1.12%)、PSP+A/R组(17.68±1.87%)(均p<0.01);APC+A/R组与PSP+A/R组相比,无显著性差异(p>0.05)。⑥平均胞内钙荧光强度值(反映细胞内Ca2+浓度):A/R组(164.66±20.42)显著高于Control组(4.86±0.76)、APC+A/R组(24.17±3.82)、PSP+A/R组(21.25±2.29)(均p<0.01);APC+A/R组与PSP+A/R组相比,无显著性差异(p>0.05)。
结论:从细胞水平验证了PSP预处理可减轻心肌细胞A/R损伤,具有与缺氧预处理操作类似的作用,其机制可能与PSP拮抗氧自由基及抑制钙超载作用有关。
