本论文系统研究了制备大蒜(Allium sativum L.)提取液的有机溶剂的筛选,探讨了大蒜提取液对黄瓜灰霉病菌(Botrytis cinerea)、黄瓜黑星病菌(Cladosporium cucumerinum)等几种重要蔬菜病原菌的室内抑菌活性测定和活体防治作用,分析纯化了大蒜提取液中抑菌有效成分,并从病原菌靶标位点、酶、蛋白质、核酸等方面研究了大蒜抑菌有效成分与病菌互作的机理。
用乙酸乙酯提取大蒜得到的提取液是几种溶剂中产率最高的,并且抑菌活性最高。在0.1μL/mL浓度下大蒜乙酸乙酯对提取液对几种病菌的孢子萌发抑制作用很强,24h抑制孢子萌发率在80%以上。该浓度下还能很好地抑制病原真菌的菌丝生长,抑制菌落扩展和生物量生长。0.1μL/mL浓度下,大蒜提取液能有效地控制黄瓜黑星病(Cladosporium cucumerinum)、黄瓜灰霉病(Botrytis cinerea)的侵染,有效地防治田间黄瓜白粉病(Erysiphe cucurbitacearum)和黄瓜霜霉病(Pseudoperonospora cubensis)的发生。
大蒜提取液在酸性和温度低于60℃条件下抑菌效果稳定,在中性和碱性条件(pH值≦7.0)和高温(温度≧90℃)环境下,大蒜提取液的抑菌效果明显降低。通过薄层层析方法,用氯仿展层,分析大蒜提取液中的成分,然后通过硅胶柱层析法,用乙酸乙酯-二氯甲烷洗脱纯化得到大蒜提取液中的抑菌活性成分,测定其比移值为0.41～0.42。
半胱氨酸拮抗试验中,0.005g/mL的L-半胱氨酸溶液能很好地拮抗大蒜提取液的抑菌活性,表明真菌中含巯基位点是大蒜提取液中有效成分的作用靶标点。在与靶标位点的-SH结合后,大蒜提取液中的有效成分竞争性地抑制了蛋白酶、细胞壁酶的催化活性,能使蛋白酶和细胞壁酶的活性完全受到抑制。大蒜提取液能抑制真菌体内代谢物质的合成,即抑制病菌蛋白质和DNA的合成,在0.025μL/mL浓度下,蛋白质合成49.3%受到抑制,DNA合成81.6%受到抑制。
通过本论文的研究,为大蒜杀菌制剂的产业化开发奠定了前期实验基础。
