微生物源α-葡萄糖苷酶抑制剂的筛选、分离纯化及产生菌的鉴定

糖尿病(DM,Diabetes Mellitus)是一种多病因的代谢疾病,其特点是餐后高血糖。α-葡萄糖苷酶抑制剂通过抑制α-葡萄糖苷酶(EC3.2.1.20)的活性,从而达到降低餐后高血糖,治疗糖尿病并防止并发症的发生。本论文试图从自然界微生物的次级代谢产物中寻找并筛选出可抑制α-葡萄糖苷酶活性的化合物来作为药物或用作新药物的先导化合物进行开发。 本论文主要从α-葡萄糖苷酶抑制剂产生菌筛选、抑制剂的分离纯化及产生菌的菌种鉴定方面进行研究,其主要的内容及创新之处包括以下四个方面: (1)α-葡萄糖苷酶抑制剂筛选模型的建立及菌株筛选:在前人的基础上,建立了有效的α-葡萄糖苷酶抑制剂筛选模型,通过该模型筛选了3000余株微生物菌株的发酵液,得到α-葡萄糖苷酶抑制剂产生菌株10余株。 (2)对其中较好的一株菌(菌号:506157)的次级代谢产物进行了分离纯化,通过HD-1大孔酚醛系弱酸性阳离子交换树脂柱层析,HZ806大孔吸附树脂柱层析,硅胶薄层层析,高效分析液相,制备液相制备等方法分离纯化得到抑制剂纯样品,该样品在纯甲醇中呈洁白絮状,蒸干后呈本白色。 (3)该抑制剂对α-葡萄糖苷酶有较强的抑制活性,体外活性约是药物拜糖苹的10倍。通过质谱和紫外扫描研究,发现其分子量为254,在240nm-260nm处有一特征吸收峰,通过MS,1HNMR,13CNMR谱图分析确定其为4’,7-二羟基异黄酮。 (4)通过形态特征,培养特征,生理生化特征以及16S rDNA序列测定及其同源性分析,证实该菌株为链霉菌属,与链霉菌属Streptomyces albulus同源性达到98%以上。