蜜桔幼果化学成分的提取、分离及生物活性研究

蜜桔为芸香科柑桔属植物,在我国长江以南地区资源丰富。长期以来,国内外对柑桔属其他植物的研究较多(如桠柑、橙、胡柚等),对蜜桔的系统研究较少。我国是世界柑桔生产大国,主要是将其成熟果实用于食用。但是柑桔类植物在生长发育期间会有较大规模的落果期,若出现较差环境条件等也会发生落果。而且有时为了保证果树高产高质,果农也会对果树进行疏果处理,人为去除一些果实。这些幼果经常就做废料处理,并未被合理利用,造成资源的浪费。 本文主要针对黄岩蜜桔幼果的化学成分进行研究并探讨其生物活性,从蜜桔幼果中共分离得到9个单体化合物,并通过质谱、核磁共振谱等鉴定了它们的结构,为其日后药理及生物活性研究提供了可靠的实验依据,以便更好地综合开发和利用蜜桔资源,为变废为宝提供研究方向。 本实验将黄岩蜜桔幼果预处理后用乙醇提取,浓缩后的水溶液用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇分别萃取,得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物、正丁醇萃取物用于化学成分的分离。 1、采用正相硅胶柱色谱方法对蜜桔的石油醚萃取物进行分离,从中得到了p-谷甾醇(β-sitosterol,Ⅰ)。 2、采用反复正相硅胶柱色谱、高速逆流色谱、制备型HPLC等方法对蜜桔的乙酸乙酯萃取物进行了分离,从中分离得到5个化合物,分别鉴定为香柑内酯(bergapten,Ⅱ)、limonexic acid (Ⅲ)、川陈皮素(nobiletin,Ⅳ)、5-降甲基蜜桔黄素(5-o-desmethylnobiletin,Ⅴ)、p-胡萝卜甙(β-daucosterol,Ⅵ),其中化合物Ⅱ、化合物Ⅲ是首次从该种植物中分离得到。 3、采用D101型大孔树脂将蜜桔的正丁醇萃取物进行粗分,依次用水、25%、50%、75%、95%的乙醇溶液将其洗脱为不同极性的组分。50%乙醇洗脱组分通过sephadex LH-20凝胶柱分离得到1个化合物,经鉴定确定为新橙皮苷(neohesperidin,Ⅶ);75%乙醇洗脱组分通过反复正相硅胶柱色谱、制备型HPLC分离得到2个化合物,经过鉴定分别为圣草枸橼苷(eriocitrin,Ⅷ)和柚皮苷(naringin,Ⅸ),其中化合物Ⅷ是首次从该种植物中分离得到。 4、应用清除DPPH自由基的方法评价揭示了分离出的3种黄酮苷类化合物的单体抗氧化能力大小,依次为Ⅶ<Ⅸ<Ⅷ。利用MTT抗肿瘤法测定了分离出的2种多甲氧基黄酮的体外抗肿瘤活性,发现受试物Ⅳ、V对人乳腺癌Bcap37细胞及人肝癌SMMC7721细胞均具有一定的体外增殖抑制作用。 此外,本论文还对近年来柑桔属类植物的化学成分研究进行了综述,本研究结果为进一步阐明蜜桔幼果中的化学成分及其生物活性奠定了一定的基础。