加味独活寄生合剂对兔膝骨关节炎软骨Ⅱ型胶原及OPG/RANKL轴的影响

目的:观察加味独活寄生合剂对膝骨关节炎(KOA)模型兔软骨OPG/RANKL轴及Ⅱ型胶原表达的影响,丰富加味独活寄生合剂治疗膝骨关节炎的作用机制。方法:3月龄新西兰雄兔24只,随机分为空白组、模型组、加味独活组和塞来昔布组,每组6只。采用Ⅱ型胶原酶膝关节腔内注射法建立兔早期KOA模型。2周后测量各组兔双膝关节肤温、周径、兔步态评分,初步检验造模是否成功。再给药6周时间。第9周,采用番红固绿染色观察各组软骨形态结构改变,免疫荧光法检测各组软骨中OPG、RANKL、2型胶原蛋白表达水平。qPCR法检测OPG、RANKL、2型胶原mRNA表达水平。结果:1.造模两周后,塞来昔布组、加味独活组、模型组右膝关节肤温、周径、兔步态评分均大于空白组,差异有显著统计学意义(P<0.01)。2.番红固绿染色显示模型组软骨损伤明显,Mankin’s评分高于空白组,差异有显著统计学意义(P<0.01)。与模型组相比,塞来昔布组和加味独活Mankin’s评分下调,差异均有显著统计学意义(P<0.01)。与塞来昔布组相比,加味独活组差异无明显统计学意义(P>0.05)。3.免疫荧光结果显示与模型组相比,加味独活组Ⅱ型胶原表达高于模型组,差异有显著统计学意义(P<0.01),与空白组相比,差异无明显统计学意义(P>0.05)。加味独活组OPG/RANKL的平均光密度值最高,与塞来昔布组及模型组相比,差异有显著统计学意义(P<0.01),与空白组相比,差异无明显统计学意义(P>0.05)。4.qPCR检测显示加味独活组OPGmRNA水平较其他各组显著上调(P<0.01),塞来昔布RANKL水平较其他各组显著上调(P<0.01)。加味独活组兔骨关节面OPG/RANKL较其他各组显著上调(P<0.01)。加味独活组Ⅱ型胶原mRNA水平较模型组显著上调(P<0.01),较塞来昔布组上调(P<0.05),与空白组相比,差异无明显统计学意义(P>0.05)。结论:1、Ⅱ型胶原酶膝关节注射法可成功建立兔KOA模型。2、加味独活寄生合剂可有效促进膝骨关节炎兔软骨Ⅱ型胶原修复,其作用机制可能和调节OPG/RANKL轴有关。