灰树花多糖的结构及其生物活性

本文以灰树花子实体为原料，利用现代分离分析手段，对灰树花多糖的提取工艺、纯化分级、理化性质、结构特性以及灰树花粗多糖和部分多糖级分的体内外抗肿瘤作用、免疫调节功能和抗氧化作用进行了较系统的研究，主要结果如下： 1 灰树花多糖的分离、纯化、性质与结构特性 灰树花子实体经沸水浸提、乙醇沉淀可得到灰树花粗多糖PGF，经正交试验，提取时总料液比为20倍（2：2：3），浸提时间10h（2：2：3）(分3次提取)，浓缩比重为1.035，醇沉浓度为80％时多糖得率最高，为13.34％。 PGF经Sevag法脱蛋白、DEAE-Sepahadex A-25柱层析可得到两种均一多糖PGF-1、PGF-2和两种非均一多糖PGF-3、PGF-4。PGF-1、PGF-2、PGF-3和PGF-4的中性糖含量分别为97.22％、95.37％、92.83％和88.71％，蛋白质含量分别为1.13％、2.25％、4.73％和8.86％，四种多糖级分均是新的糖蛋白质缀合物。经气相色谱分析PGF-1为葡聚糖，PGF-2、PGF-3和PGF-4由葡萄糖、甘露糖和半乳糖组成，摩尔比分别为1：2.35：1.22、1：0.35：0.24和1：0.22：0.38。经GPC法检测，PGF-1和PGF-2的数均分子量分别为117262.0Dal和118803.4Dal，重均分子量分别为118237.7Dal和119612.5Dal。经红外光谱与NMR分析，四种多糖级分主要含α-糖苷键，PGF-2还含有少量β-糖苷键。经紫外光谱分析与β-消除反应分析，四种多糖级分的糖蛋白分子中多糖与氨基酸的连接方式含O-连接，且PGF-2中存在-O-Ser连接。四种多糖级分可与刚果红发生颜色反应，但不能肯定多糖级分为螺旋结构。 2 灰树花多糖的抗肿瘤作用及机理研究 PGF、PGF-1、PGF-2、PGF-4体外均对S180肿瘤细胞有较强的抑制作用，在中、高剂量下（0.04～4μg／孔）四种多糖的抑制作用相差不大，在低剂量下（0.004μg／孔）PGF与PGF-1的抑瘤效果优于PGF-2和PGF-4。4种多糖与S180细胞共同培养24h后，能降低肿瘤细胞膜唾液酸的含量，三种多糖级分具有抑制肿瘤细胞膜流动性改变的作用，而PGF无此作用。四种多糖均能降低肿瘤细胞膜中花生四烯酸的含量。 PGF与PGF-1灌胃剂量50～150 mg／kg·d时，对小鼠S180肉瘤的抑制率分别为26.95％～37.59％和20.57％～34.75％，同剂量下PGF-1的抑制作用低于PGF。PGF与PGF-1对荷瘤小鼠血清乳酸脱氢酶的活性无影响；能显著提高荷瘤小鼠红细胞过氧化氢酶的活性。两种多糖能明显提高荷瘤小鼠免疫脏器胸腺的重量，但对脾脏重量的增长作用不显著；能明显增强荷瘤小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬功能；明显增强淋巴细胞转化功能，并呈现剂量效应关系；明显增强DNFB诱导的迟发型超敏反应； 华中农业大学2002’博士学位论文 显著增强荷瘤小鼠脾抗体生成能力;明显提高血清lgM溶血素的含量，揭示它们具 有增强荷瘤小鼠特异性和非特异性免疫功能的作用。 3灰树花多糖的抗氧化作用 灰树花粗多糖和4种多糖级分均有明显抑制·OH和02‘一的作用，并呈现量效关 系。PGF、PGF一1、PGF一2、PGF一3和PGF一4对心H的半数抑制浓度（ICS。）分别为 1.45 mg/ml、l.88mg/ml、l.72mg/ml、5.69mg/ml和o.6lmg/ml;对02’一的IC5o值分 别为442.62卜g/ml、588.89林g/ml、700.53林g/ml、458.45林g/ml和375.29林g/ml。 灰树花粗多糖和4种多糖级分均能抑制小鼠体外温育、Fe2+诱导和H20:诱导下 肝匀浆MDA的生成，其中抑制活性最强的为PGF一4，其次是PGF，其它3种多糖 的作用相差不大。5种多糖在0.05mg/ml一1.6Omg/ml浓度下能抑制小鼠肝线粒体 MDA的生成，在0.2mg/ml和0.smg/ml浓度下能抑制小鼠肝线粒体的肿胀。PGF、 pGF一1、pGF一2和pGF一4均可对抗reZ++ve引起的小鼠肝线粒体膜流动性的下降， 表明灰树花多糖具有抑制肝线粒体氧化损伤的作用。 pGF、pGF一l、pGF一2和pGF一4在67卜g/ml一533“g/ml的浓度下能明显抑制HZoZ 诱导的大鼠红细胞氧化溶血和体外温育下红细胞MDA的生成，对大鼠红细胞的氧 化损伤具有保护作用。