葛根素对人中性粒细胞体外激活后细胞内核转录因子及炎性细胞因子表达的影响

目的:通过观察葛根素预处理( Puerarin )对细菌脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS;或称endotoxin,内毒素)体外诱导激活人中性粒细胞后细胞内核转录因子-кB(NF-кB)(P65)及炎性细胞因子表达的影响,研究葛根素抑制全身炎症反应综合症的分子机制,为葛根素应用于心肌-缺血再灌注损伤心肌保护作用提供理论依据。方法:选择正常成年志愿者(身体健康、近期未患任何疾病、近期无用药、过度疲劳及烟酒史)。抽取静脉血15ml,分别作五种处理(每组3ml):(1)空白对照组;(2)免疫球蛋白同型对照组;(3)内毒素(1ug/ml)处理组;(4)葛根素预处理(10ug/ml)加内毒素(1ug/ml)处理组(实验组1);(5)葛根素预处理(50ug/ml)加内毒素(1ug/ml)处理组(实验组2)。采用流式细胞技术(Flow cytometry, FCM)检测各组全血中中性粒细胞内核转录因子NF-кB及炎性细胞因子白细胞介素-6(IL-6)和白细胞介素-8(IL-8)的表达水平。结果:(1)空白组NF-кB的表达水平很低。与空白组相比,内毒素组NF-кB表达明显增加(p =0.000,p<0.01),10ug/ml葛根素预处理组与50ug/ml葛根素预处理组表达明显增加(p =0.018,p<0.05)。10ug/ml及50ug/ml葛根素预处理组NF-кB表达明显低于内毒素组(p=0.000,p<0.01)。10ug/ml葛根素预处理组与50ug/ml葛根素预处理组相比,没有统计学差异(p>0.05)。(2)空白组基本没有IL-6表达。与空白组相比,内毒素组IL-6表达水平明显增加(p =0.000,p<0.01),10ug/ml葛根素预处理组与50ug/ml葛根素预处理组表达明显增加(p=0.000,p<0.01)。10ug/ml及50ug/ml葛根素预处理组IL-6表达明显低于内毒素组(p=0.000, p<0.01)。10ug/ml葛根素预处理组与50ug/ml葛根素预处理组相比,没有统计学差异(p>0.05)。(3)空白组基本上没有IL-8的表达。与空白组相比,内毒素组IL-8表达明显增加(p=0.000,p<0.01),10ug/ml葛根素预处理组与50ug/ml葛根素预处理组表达明显增加(p=0.000,p<0.01)。10ug/ml及50ug/ml葛根素预处理组IL-8表达明显低于内毒素组(p=0.000,p<0.01)。10ug/ml葛根素预处理组与50ug/ml葛根素预处理组相比,没有统计学差异(p>0.05)。(4)免疫球蛋白同型对照组是与染色的单克隆抗体特异性无关的免疫球蛋白亚型。结论:葛根素预处理可能通过抑制中性粒细胞内NF-кB活化,减少中性粒细胞内IL-6、IL-8的生成和释放,从而减轻全身炎症反应综合症(Systemic inflammatory response syndrome,SIRS)。