菊苣酸的临床前药代动力学研究

目的考察菊苣酸(CRA)对人源CYP450酶的体外抑制作用,研究CRA在Caco-2细胞中的转运特征及CRA在大鼠原位肠血管灌流模型和大鼠体内的药代动力学。方法(1)在混合人肝微粒体孵育体系中,分别以非那西丁O-脱乙基化(CYP1A2)、安非他酮羟基化(CYP2B6)、阿莫地喹去乙基化(CYP2C8)、双氯芬酸4’-羟基化(CYP2C9)、S-美芬妥英4’-羟基化(CYP2C19)、右美沙芬O-去甲基化(CYP2D6)、咪达唑仑1’-羟基化(CYP3A4/5)和睾酮6β-羟基化(CYP3A4/5)反应作为7种CYPP450酶亚型代谢活性的标志,并用阳性抑制剂对试验体系进行验证。建立LC-MS/MS法检测各特征性反应的代谢物生成量,并计算CRA的IC50值,通过代谢转化的变化来考察CRA对人肝微粒体中CYP450酶7种亚型的体外抑制作用。(2)建立了Caco-2细胞中CRA的测定方法,以P-gp底物地高辛作为阳性对照,考察CRA在不同浓度(1μM、10μM和100μM)时其在Caco-2细胞单层上的跨膜双向转运情况。(3)建立了大鼠原位肠血管灌流模型,通过十二指肠给药研究肠对CRA的吸收。(4)大鼠24只随机分为四组,口服CRA低(25 mg/kg)、中(50 mg/kg)、高(100mg/kg)三个剂量组和一个静脉注射组(2 mg/kg),采用建立的LC-MS/MS法测定血浆中CRA及其代谢物CAFA和CA的浓度,运用药动学软件DAS2.0计算出相应的药动学参数。结果(1)CRA对CYP450酶7种亚型(CYP1A2、CYP2B6、CYP2C8、CYP2C9、CYP2C19、CYP2D6、CYP3A4/5(底物为咪达唑仑、睾酮))均没有明显的抑制作用。(2)CRA在不同浓度(1μM、10μM和100μM)时,从腔面到基底面(AP→BL)的表观渗透系数(Papp)值分别为(0.68±0.07)×10-6 cm/sec、(0.85±0.04)×10-6 cm/sec和(0.84±0.05)×10-6 cm/sec,从基底面到腔面(BL→AP)的Papp值分别为(0.70±0.09)×10-6 cm/sec、(0.83±0.10)×10-6 cm/sec和(0.85±0.09)×10-6 cm/sec,外排比率ER值均接近1。(3)十二指肠给药后,肠血管灌流模型中CRA在灌流液中的浓度随时间的变化而增大,在90 min时趋于稳定,肠吸收率为(12.6±0.57)%。(4)大鼠口服CRA后在体内表现为二室模型,达峰时间晚,消除较慢。大鼠口服低、中、高剂量CRA后的药动学参数:药时曲线下面积(AUC(0-∞))分别为7886.8±208.9μg/L*h、35468.8±1737.4μg/L*h、45422.1±398.4μg/L*h;半衰期(T1/2z)分别为4.79±1.09 h、5.15±0.9 h、4.80±0.70 h;清除率(CLz)分别为3.3±0.1 L/h/kg、1.4±0.07 L/h/kg、2.2±0.02 L/h/kg;表观分布容积(Vz)分别为22.5±4.9 L/kg、10.4±1.4 L/kg、15.2±2.3 L/kg;最大血药浓度(Cmax)分别为1097.7±84.4μg/L、3666.0±195.4μg/L和5597.0±325.0μg/L;达峰时间(Tmax)均为4.0 h。大鼠尾静脉注射2.0 mg/kg CRA后的药动学参数:AUC(0-∞)为51432.7±3650.2μg/L*h;T1/2z为4.5±0.4 h;CLz为0.04±0.003 L/h/kg;Vz为0.25±0.034 L/kg。结论CRA对人CYP450酶无抑制作用,表明其在临床药物配伍中不会对其他药物造成潜在的有关肝药酶抑制方面的药物相互作用风险;CRA在大鼠体内的绝对生物利用度较低,在大鼠体内存在明显的代谢,其肠细胞跨膜转运通透性较差,跨膜方式可能主要为被动转运。