补中益气汤及其配伍的药效学研究

目的 补中益气汤为金元时期李东垣所创,首载于《脾胃论》,由李氏根据《内经》中“损者益之”、“劳者温之”之旨而制定。该方组方严谨,用药精良,其中“益气升阳”配伍是该方的一大特色,历代医学工作者的临床观察结果证明,用该方治疗脾虚证有显著的疗效。大量的实验研究表明,该方有调节肠胃功能,增强机体免疫力和较好的胃黏膜保护作用,但其机制缺乏深入研究。 本研究着重研究补中益气汤及其“益气升阳”配伍的作用特点,从药理效应、体内激素、分子生物学等方面进行研究,分析“益气升阳”配伍—“药效”—“作用机制”之间的相关性,探索该方“益气升阳”配伍的科学原理,将把该方的研究推向更深层次,为该方的临床应用和进一步研究提供科学依据。 方法 1.补中益气汤“益气升阳”配伍对脾虚小鼠作用的研究 方法：以大黄法、游泳力竭法、饥饿法三因素复合的方法复制脾虚小鼠模型,造模成功后,将小鼠随机分成正常对照组、脾虚模型组、补中益气汤组、“黄芪-升麻、柴胡”药对配伍组和原方去“黄芪-升麻、柴胡”配伍组,分别给药一周后进行耐寒冷及抗疲劳机能试验,观察不同组别药物对小鼠胸腺指数、脾指数及胃肠推进的影响。 2.补中益气汤及“益气升阳”配伍对脾虚大鼠药理效应的影响 方法：以大黄法、游泳力竭法、饥饿法三因素复合的方法复制脾虚大鼠模型,造模成功后,将大鼠随机分成正常对照组、脾虚模型组、补中益气汤组、“黄芪-升麻、柴胡”药对配伍组和原方去“黄芪-升麻、柴胡”配伍组,给药14天后测定大鼠胃黏膜血流量、肌酸激酶活性、D-木糖血清浓度、淀粉酶活性及胃泌素含量。 3.补中益气汤“益气升阳”对脾虚大鼠胃泌素基因表达的影响 方法：以大黄法、游泳力竭法、饥饿法三因素复合的方法复制脾虚大鼠模型,造模成功后,将SD大鼠随机分成正正常对照组、脾虚模型组、补中益气汤组、“黄芪-升麻、柴胡”药对配伍组和原方去“黄芪-升麻、柴胡”配伍组,给药14天后处死大鼠,取出胃,冰上剪取胃窦。采用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR法)检测GAS mRNA。 4.补中益气汤“益气升阳”对脾虚大鼠TFF1蛋白表达的影响 方法：以大黄法、游泳力竭法、饥饿法三因素复合的方法复制脾虚大鼠模型,造模成功后,将SD大鼠随机分成正正常对照组、脾虚模型组、补中益气汤组、“黄芪-升麻、柴胡”药对配伍组和原方去“黄芪-升麻、柴胡”配伍组,给药14天后处死大鼠,取出胃,沿胃大弯剪开,用0.9%NaCl冲洗干净胃黏膜,选择胃黏膜病变相同部位剪取小块,放入10%中性福尔马林缓冲液中固定,采用免疫组化法检测三叶因子1(TFF1)蛋白表达的变化。 成果 本实验研究结果表明：①补中益气汤组、“黄芪-升麻、柴胡”药对配伍组、原方去“黄芪-升麻、柴胡”配伍组能提高小鼠抗疲劳机能、脾指数、胸腺指数及胃肠推进率,而“黄芪-升麻、柴胡”药对配伍组和原方去“黄芪-升麻、柴胡”配伍组对小鼠耐寒冷能力影响不大。 ②补中益气汤组能有效改善脾虚大鼠胃黏膜血流量、D-木糖血清浓度、血清肌酸激酶、淀粉酶活性及胃泌素含量,而“黄芪-升麻、柴胡”药对配伍组和原方去“黄芪-升麻、柴胡”配伍组除了能显著提高淀粉酶活性外,对其他四项试验指标没明显作用。 ③补中益气汤组能有效改善脾虚大鼠GAS mRNA的表达,而“黄芪-升麻、柴胡”药对配伍组和原方去“黄芪-升麻、柴胡”配伍组对其作用不大。 ④补中益气汤组能上调脾虚大鼠TFF1的表达,而“黄芪-升麻、柴胡”药对配伍组和原方去“黄芪-升麻、柴胡”配伍组对其无显著影响。 结论 胃肠道作为人体最大的内分泌器官,遍布分泌胃肠激素的内分泌细胞。胃肠激素调控着消化道的分泌、运动、吸收、血流和细胞营养等功能,它们的分泌异常必然会影响消化道的功能,引起各种临床症状和综合症。胃泌素是由胃窦及十二指肠近端黏膜中的G细胞分泌,其主要生理作用为促进胃酸分泌,使胃黏膜血流增加,对胃肠黏膜有营养作用。正常的胃黏膜血液循环对维持胃黏膜的生理功能有十分重要的作用。基础研究中已证实补中益气汤有调补脾胃,升阳举陷的功能,并有多方面的免疫调节作用。 祖国医学认为,胃主受纳与腐熟水谷,脾主运化水谷精微,脾胃功能正常则能化生气血以提供人体所需的营养物质,使全身脏腑组织、器官得到充分的营养,从而保证身体各种生理功能的正常进行。脾虚时淀粉酶分泌存在障碍,淀粉酶分泌不足势必影响动物体内营养物质的吸收。D-木糖是一种戊糖,内服后主要由十二指肠与空肠经易化扩散而吸收,需消耗能量,与细胞膜表面的Na+一K+-ATP酶有关；脾虚时Na+一K+-ATP酶降低,小肠黏膜具有吸收功能的绒毛寿命、长度变短,数量减少,从而导致D-木糖吸收下降。肌酸激酶(CK)催化体内ATP与肌酸之间高能磷酸键转换生成磷酸肌酸和ADP的可逆反应,为肌肉收缩和运输系统提供能量来源。在饮食失节所致的脾虚模型中,ATP供能相对缺乏,故血液中CK活性降低以减少ATP的分解,减少能量消耗。三叶因子1(TFF1)主要分布于胃黏膜,是由胃黏膜上皮细胞分泌的一种小分子多肽,对胃肠黏膜有重要的保护作用,并可促进受损胃黏膜的重建修复,是通过抑制细胞增值与凋亡来实现的。从观察补中益气汤及“益气升阳”配伍对GAS mRNA基因表达和TFF1蛋白表达的角度,去研究补中益气汤治疗脾虚证的作用机制,对阐释脾虚证得病理机制和补中益气汤的配伍原理有重要理论意义。 综合研究结果分析,脾虚小鼠的抗寒冷和抗疲劳机能、脾指数、胸腺指数及胃肠推进率均显著下降,脾虚大鼠的胃黏膜血流量、D-木糖血清浓度、血清肌酸激酶、淀粉酶活性、三叶因子1、胃泌素基因和胃泌素含量也呈显著下降,提示脾虚时机体胃黏膜防御和吸收功能下降。经过补中益气汤治疗后,它们的表达有显著的上调,提示该方可通过提高胃肠激素的表达,增强胃黏膜的屏障保护作用。同时可增强三叶因子1的表达,加速修复胃黏膜细胞。这在一定程度上体现了中药方剂发挥作用的多靶点,多层次的作用特点。但“黄芪-升麻、柴胡”药对配伍组和原方去“黄芪-升麻、柴胡”配伍组除能增强动物的抗疲劳机能、胸腺指数、脾指数、胃肠推进和血清淀粉酶含量外,对其他指标则无明显影响。 补中益气汤主要是由“益气药”与“升阳药”配伍而成的有效方剂。以上实验结果表明,补中益气汤去掉“升阳”药物后,其药理效应有所减弱；单独使用“升阳”药物进行治疗,其药理作用也明显小于补中益气汤原方,更进一步说明补中益气汤“益气升阳”配伍的合理性。