柑橘黄酮类成分对神经细胞氧化损伤的保护及作用机制研究

活性氧簇ROS在阿尔茨海默病(AD)、帕金森症(PD)等与衰老有关的神经退行性疾病中起重要作用。大脑中的神经细胞对自由基格外敏感,极易受到氧化损伤,最终导致AD、PD等疾病的发生。因此积极寻找和开发高效低毒的抗氧化剂,是医药学界的一项重大课题。 柑橘黄酮是柑橘属植物中所含有的具有广泛生理活性的物质,文献报道具有抗氧化、抗癌、抗菌、消炎等活性。本论文优化得到柑橘总黄酮的制备工艺。利用95%乙醇提取液从中药陈皮中提取总黄酮,经AB-8大孔树脂吸附、60%乙醇洗脱液解析后蒸干即得柑橘总黄酮,产品得率为2.61±0.23%；经UV法测得柑橘总黄酮含量为83.46±1.24%(以橙皮苷为参照)；经HPLC法检测其主要成分为橙皮苷及川陈皮素。 利用150μM H202处理PC12神经细胞3h作为氧化损伤模型,分别考察了黄酮苷类的柚皮苷(Naringin)、橙皮苷(Hesperidin)、新橙皮苷(Neohesperidin)及多甲氧基黄酮类的川陈皮素(Nobiletin)四种柑橘黄酮单体及上述工艺制备的柑橘总黄酮(Total citrus flavonoids)对氧化损伤的PC12细胞的保护作用。研究表明,柑橘黄酮预处理降低了氧化损伤细胞内LDH的释放率、增加了线粒体膜电位；提高了GSH含量与SOD的酶活,并降低了氧化损伤细胞内ROS与MDA的含量,表明柑橘黄酮可保护氧化损伤细胞生物膜的稳定性、增强细胞内抗氧化能力并可改善H202造成的氧化应激程度。通过对凋亡蛋白酶及凋亡率的检测发现,柑橘黄酮预处理降低了氧化损伤细胞内Caspase-3凋亡蛋白酶的活性、降低了细胞凋亡率,表明柑橘黄酮可通过抑制Caspase-3酶原的活化来降低氧化损伤细胞的凋亡率。从研究结果可看出,橙皮苷对氧化损伤神经细胞的保护作用最为显著,且柑橘黄酮苷类化合物的神经保护作用优于柑橘多甲氧基类黄酮化合物。 研究结果提示柑橘黄酮类成分有可能用于与氧化损伤有关的脑疾病,如AD和PD等神经退行性疾病的防治。