目的:本实验以补骨脂-肉豆蔻药对为研究对象,从含量变化角度优选该药对的最佳配伍比例;采用正交设计,以多指标为研究对象,优化药对的提取工艺,并采用UPLC-Q-TOF/MS技术展开该药对水提部位的定性分析,明确该药对的水提部位的成分信息,并与前期醇提工艺的研究进行比较,明确其不同溶媒提取成分的含量和种类差异,为该药对的进一步药效学研究及新制剂开发奠定基础。方法:1.补骨脂-肉豆蔻药对不同比例及配伍前后化学成分含量和种类变化研究本实验以补骨脂、肉豆蔻药对经典配伍比例2:1为核心及在查阅文献的基础上设计7个不同比例(补骨脂:肉豆蔻)3:1、2:1、1:1、1:0、0:1、1:2、1:3,按照传统水提工艺,提取主要化学成分。经过前期预实验,选取补骨脂素、异补骨脂素、补骨脂乙素、去氢二异丁香酚、补骨脂酚的含量为考察指标,采用HPLC双波长法测定补骨脂、肉豆蔻药对不同比例配伍前后水提液中有效成分含量,寻求发挥最佳作用的配伍比例。2.补骨脂-肉豆蔻药对水提工艺的优化及与醇提工艺结果比较。本实验以正交实验结合指纹图谱的多指标综合加权评分法优选补骨脂-肉豆蔻药对水提工艺。以浸润时间(A)、蒸馏水用量(B)、提取时间(C)、提取次数(D)为考察因素,根据相关文献及预实验,以补骨脂素、异补骨脂素、补骨脂乙素、去氢二异丁香酚及补骨脂酚的转移率及UPLC指纹图谱特征峰总面积为综合考察指标,每个因素3个水平,按L9(34)正交表进行试验,优化最佳水提工艺,按优化的工艺条件提取该药对中的指标成分,并与醇提条件下的指标成分转移率、共有峰数量及归属等方面进行比较。3.补骨脂-肉豆蔻药对水提部位的定性研究及醇提部位差异分析基于UPLC-Q-TOF/MS技术在正负两种离子模式下,对补骨脂-肉豆蔻药对中的化学成分进行定性鉴别。主要是通过一级质谱确定精确分子量,利用Masslynx V4.1软件推断可能的元素组成,在经Chemexper和SDBS数据库及二级质谱裂解的碎片离子信息进行匹配,与已知成分进行验证,最终鉴别未知的化合物,并与醇提部位中的已鉴定的总化合物种类及未知化合物种类进行对比。结果:1.优选补骨脂、肉豆蔻质量比2:1为药对不同比例配伍中的最佳配比。2.本实验优选补骨脂-肉豆蔻药对的最佳水提工艺:蒸馏水浸润40 min,8倍量蒸馏水提取3次,每次1 h,经对比发现,水提工艺下的指标成分的转移率、共有峰数低于醇提工艺,结果表明,药对配伍后引起差异的化学成分大部分来自于补骨脂,可能是提取的水溶性成分较多或是高温所致成分的分解所致,故在提取该药对的化学成分进行药效学研究时,应综合考虑制剂中发挥药效的指标成分的化学性质,优选提取工艺。3.通过UPLC/Q-TOF-MS技术对该药对中的化学成分进行定性鉴别,共鉴定19种化合物,包括14种未知化合物,归属后与醇提工艺下的鉴定的总化合物及未知化合物种类进行对比,结果表明香豆素类、黄酮类、木脂素类及单萜酚类四大类化合物是水提及醇提部位的共有成分,因共有成分中每类化合物的数量仍存在差异,水提部位的香豆素类及黄酮类化合物较醇提部位增多,其他两类化合物变化不大,则香豆素类、黄酮类为其主要差异性成分,说明水提工艺及醇提工艺各有优缺点,需通过药效学进一步比较。结论:从指标成分含量变化角度优选补骨脂、肉豆蔻质量比2:1为药对不同比例配伍中的最佳配比;通过优化的水提工艺与醇提工艺的对比,阐明化学成分差异大部分来源于补骨脂;补骨脂-肉豆蔻药对水提部位的定性分析及醇提部位差异研究表明,虽水提部位指标成分含量低于醇提部位,但其化合物种类方面优于醇提,表明水提及醇提工艺各有优缺点,需进一步通过药效进行比较,故在提取该药对的化学成分进行药效学研究时,应综合考虑制剂中发挥药效的指标成分的化学性质,优化提取工艺。本论文从物质基础角度阐述水提部位与醇提部位化学成分在含量及种类的差异,为下一步药效学研究及新制剂的开发奠定基础。
