类风湿性关节炎（rheumatoid arthritis, RA）是一种常见的软骨及骨破坏为主要表现的慢性自身免疫性疾病，具有较高的发病率和致残率，严重影响人们的正常生活，也是造成人群劳动力丧失的主要疾病之一。但至今该病的发病机制尚未完全明确，大量研究证实其病理环节为免疫功能失调、关节滑膜细胞过度增殖与滑膜增厚、关节软骨与骨破坏等三个方面。治疗关节炎的药物有很多，但尚缺乏真正有效而副作用小的治疗药物。为了系统而合理的解释RA的发生和发展过程，因此，寻找作用显著、副作用小的RA治疗药物成为RA的研究热点。
橙皮苷(hesperidin, HDN)为橙皮素与双糖芸香糖形成的二氢黄酮苷类化合物，本实验室前期的研究证明，HDN具有较强的抗炎镇痛作用和免疫调节功能,对佐剂性关节炎（adjuvant arthritis,AA）大鼠具有治疗作用。然而其水溶性较差、生物利用度不高等缺陷限制了其在医药领域的广泛应用，目前国内外对橙皮苷的结构改造方面有着深入的研究，通过橙皮苷结构修饰后得到的衍生物，其水溶性、吸收性以及药物疗效都有了一定的改善。在前期研究中，我们针对橙皮苷的结构特征进行了结构修饰，得到了一系列橙皮苷衍生物，对橙皮苷衍生物进行了抗炎活性筛选发现，5，7，3'-三乙酰橙皮素（5,7,3'-teiacetyl hesperetin, TAHP）和7，3′-二甲氧基橙皮素（7,3'-dimethoxy hesperetin, DMHP）具有较好的抗炎活性。本课题以AA大鼠为对象，观察TAHP对AA大鼠的治疗作用，同时从影响AA大鼠滑膜组织或细胞增殖/凋亡角度探讨了其治疗AA的可能作用机制，为将其开发为治疗RA的新药奠定实验基础。主要内容概括如下：
1.5，7，3'-三乙酰橙皮素对AA大鼠的治疗作用及对Jak2/Stat3信号通路的抑制作用
目的：明确TAHP对AA大鼠的治疗作用，并进一步阐述TAHP在调节Jak2/Stat3信号通路过程中的重要作用。方法：用弗氏完全佐剂造佐剂性关节炎模型。分三个剂量组灌胃给药：33mg/kg，66mg/kg，132mg/kg。检测继发性足肿胀、多发性关节炎指数、免疫器官指数、体重的变化以及病理，评价TAHP对佐剂性关节炎大鼠的治疗作用。ELISA法检测血清中IL-6的分泌水平，RT-PCR和Western blot法检测Jak2/Stat3信号通路相关分子的表达。结果：TAHP(66,132mg/kg)可以抑制继发性足肿胀，恢复免疫器官指数以及降低多发性关节炎指数。病理结果表明TAHP可以不同程度的缓解AA的病理特点，下调血清IL-6的分泌水平，并降低滑膜组织中Stat3和Jak2的mRNA表达和p-Jak2/Jak2和p-Stat3/Stat3的表达。结论：TAHP对AA具有治疗作用，其机制可能与抑制Jak2/Stat3信号通路有关。
2.5，7，3'-三乙酰橙皮素对AA大鼠成纤维样滑膜细胞Jak2/Stat3信号通路及凋亡相关蛋白的影响
目的：研究TAHP对佐剂性关节炎大鼠成纤维样滑膜细胞（fibroblast-likesynoviocytes，FLS）Jak2/Stat3信号通路及凋亡相关蛋白的影响。方法：用弗氏完全佐剂诱导大鼠AA模型；MTT法检测FLS的增殖反应；Hoechst33258染色法检测FLS的凋亡；RT-PCR法检测FLS中Jak2、Stat3、Bcl-2、Bax及Caspase-3的基因表达；Western blot法检测FLS中p-Stat3及Caspase-3的蛋白表达情况。结果： TAHP呈剂量和时间依赖性抑制FLS的增殖(P<0.05)；Hoechst33258染色结果暗示了TAHP可以明显地促进FLS的凋亡；同时TAHP（50,250μmol/L）可以明显降低Jak2、Stat3及Bcl-2表达，而上调Bax及Caspase-3表达；Western blot结果显示，TAHP可降低p-Stat3的表达、上调Caspase-3表达。结论：TAHP可以抑制FLS增殖，其作用机制可能与抑制FLS Jak2/Stat3信号通路、促进Bax及Caspase-3表达、抑制Bcl-2的表达有关。
