CaN/NFAT抑制剂对SHR T淋巴细胞CaN/NFAT信号通路、钾通道及炎症因子的体内干预研究

目的:已有研究发现CaN/NFAT抑制剂能够抑制高血压的发生,但具体的作用机制尚不清楚。本研究通过检测并分析SHR(自发高血压大鼠)经钙调神经磷酸酶-活化T细胞核因子(CaN-NFAT)信号通路抑制剂环孢素A(CsA)VIVIT体内干预后,T淋巴细胞Kv1.3通道电流变化以及T淋巴细胞Kv1.3通道(KCCN4)IL-6、TNF-α基因蛋白水平、CaN、NFAT活性变化的分析;从Ca/NFAT信号通路抑制剂体内药物干预水平,探讨钾通道-Ca N/NFAT信号通路-炎症-高血压病之间的关系,通过研究证实Kv通道通过CaN/NFAT信号通路激活淋巴细胞释放炎性细胞因子参与高血压病的发生发展的研究假设,为治疗高血压的炎症调节机制提供可能的研究证据。方法:1)自发性高血压大鼠(SHR)作为实验对象,分为5组:WKY组空白组、安慰剂组、CsA组、VIVIT组,每组6只,利用膜片钳方法测定经CsA、VIVIT体内干预前后Kv1.3通道电流变化,CsA、VIVIT处理不同条件下对其电流的影响;2)自发性高血压大鼠(SHR)作为实验对象,分为5组:空白正常大鼠WKY组、空白SHR组、安慰剂组、CsA组、VIVIT组,每组6只,经CSA、VIVIT体内干预前后分别测定:荧光免疫组化检测T淋巴细胞CaN和NFAT活性;Real-time PCR和Western blot技术检测T淋巴细胞Kv通道(KCCN4)IL-6、TNF-α基因和蛋白的表达。结果:1)CaN/NFAT抑制剂CsA、VIVIT作用下,SHR淋巴细胞的Kv1.3通道电流显著降低;2)空白SHR组、安慰剂组CaN和NFAT活性是增加的,CSA组、VIVIT组CaN和NFAT活性较空白SHR组、安慰剂组显著降低,差异有统计学意义;3)SHRT淋巴细胞Kv通道(KCCN4)IL-6、TNF-α基因和蛋白表达较WKY组增高;CsA组、VIVIT组Kv通道(KCCN4)IL-6、TNF-α基因和蛋白表达较空白SHR组、安慰剂组均显著降低,差异有统计学意义,且Kv通道(KCCN4)IL-6、TNF-α基因和蛋白水平呈正相关。结论:1)CaN/NFAT抑制剂CsA、VIVIT能够阻滞SHR淋巴细胞的Kv1.3通道电流;2)CsA、VIVIT会使CaN和NFAT活性降低;3)CsA、VIVIT能够显著降低SHRT淋巴细胞Kv通道(KCCN4)IL-6、TNF-α基因和蛋白表达水平。